El método de detección de proteínas biuret es el siguiente como referencia:
1. Método Biuret
1. El método biuret es un método para la identificación de métodos de análisis de proteínas. El reactivo de Biuret es una solución de prueba alcalina que contiene cobre, de color azul, preparada a partir de hidróxido de potasio al 1%, unas gotas de sulfato de cobre al 1% y tartrato de potasio y sodio. Cuando el sustrato contiene un enlace peptídico (polipéptido), el cobre en la solución de prueba se coordina con el péptido y el complejo se vuelve violeta.
2. La concentración se puede analizar mediante colorimetría. La longitud de onda en el espectro ultravioleta-visible es de 540 nm. La sensibilidad de la reacción de identificación es de 5-160 mg/ml. Unidades de proteína de reacción de identificación 1-10 mg. El color del complejo púrpura producido por la reacción de biuret es proporcional a la concentración de proteína y no tiene nada que ver con el peso molecular de la proteína y la composición de aminoácidos, por lo que puede usarse para determinar el contenido de proteína.
3. El verdadero papel en el reactivo de biuret es el sulfato de cobre, mientras que el hidróxido de potasio es únicamente el de proporcionar un ambiente alcalino, por lo que puede ser sustituido por otras bases, como el hidróxido de sodio. Agregar yoduro de potasio al reactivo puede extender la vida útil del reactivo. Ingredientes: Hidróxido de potasio, sulfato de cobre, tartrato de potasio y sodio.
2. Principio experimental
1. El biuret (NH2CONHCONH2) es un producto que se obtiene calentando dos moléculas de urea a unos 180°C para liberar una molécula de amoniaco. En una solución alcalina fuerte, el biuret forma un complejo púrpura con iones de cobre divalentes, lo que se denomina reacción de biuret. Cualquier enlace peptídico que tenga dos grupos amida o dos enlaces peptídicos conectados directamente, o un enlace peptídico que pueda conectarse con un átomo de carbono intermedio.
2. Todos estos compuestos tienen reacción de biuret. El color del complejo violeta es directamente proporcional a la concentración de proteínas y no tiene nada que ver con el peso molecular de las proteínas ni con la composición de aminoácidos, por lo que puede usarse para determinar el contenido de proteínas. Las principales sustancias que interfieren con esta determinación incluyen: sulfato de amonio, tampón Tris y ciertos aminoácidos.
3. Las ventajas de este método son que es más rápido, diferentes proteínas producen tonos de color similares y hay pocas sustancias que interfieran. La principal desventaja es su escasa sensibilidad y no es adecuado para la determinación de trazas de proteínas.