1. Cepa
E. coli) K12SF+ 02sf+
2) Medio de cultivo. Medio líquido: 10 ml/botella*4.
2) 2 veces medio de cultivo líquido LB: 3 ml/tubo*2
3) Medio de cultivo sólido LB: 250 ml/botella*1.
4) Medio sólido básico: 300 mL/botella*1.
5) Medio líquido básico libre de nitrógeno: 5 mL/botella*1.
6) Medio de cultivo líquido básico 2N: 5ml/tubo*1.
Aminoácidos y vitaminas mezclados
Los aminoácidos se dividen en 7 grupos, de los cuales 6 grupos tienen 6 aminoácidos en cada grupo. Cada aminoácido se muele uniformemente y se mezcla bien (si es). El aminoácido utilizado es tipo dl, es necesario duplicar la dosis).
Ⅰ
Confía en
sulfuro de metilo
refinado
cisteína
purina
Cistina
II
Grupo II
Refinada
Abreviatura de Suzhou /La abreviatura de la provincia de Jiangsu/ La abreviatura de la Unión Soviética/Un apellido
Tipos
Espárragos
Pirimidina
Ⅲ
El tercero /tercero de diez días de secado
Sulfuro de metilo
La abreviatura de Suzhou/la abreviatura de la provincia de Jiangsu/la abreviatura de la Unión Soviética/un apellido
Leche Hidroxi Reserva
Dulces
Seda
IV
Light
Cisteína
Tipo
Emulsión de reserva de hidroxi
Diferente brillo
Tejido de seda jacquard
Ⅴ
Fenil propilo
Cistina
Espárragos
Dulces
Varios brillos
Quesos
Ⅵ
Color
Purina
Pirimidina
Seda
Tejido Jacquard de seda
Queso
Ⅶ
Carne seca
Ⅷ
Vitaminas mixtas (B1, B2, B6, ácido pantoténico, p-aminobenceno Ácido fórmico, ácido nicotínico y biotina se muelen en partes iguales y se mezclan bien).
1. Preparación de la solución bacteriana: Inocular E. coli K12 en un matraz Erlenmeyer que contenga 10 ml de medio LB y cultivarlo a 37°C durante la noche. Un matraz Erlenmeyer de 0,3 ml inoculado con 10 ml de medio LB se cultivó a 37ºC durante 5 horas. Dividir en dos tubos de centrífuga de 5 ml, 8000 rpm, 3 veces; desechar el sobrenadante, agregar 2 ml de solución salina fisiológica, mezclar bien y preparar 4 ml de suspensión bacteriana.
2. Mutagénesis ultravioleta: Vierta 3 ml de suspensión bacteriana en una placa de Petri pequeña (7 cm), coloque la placa de Petri bajo una lámpara ultravioleta y esterilícela junto con la tapa durante 65438 ± 0 minutos, luego ábrala. la tapa e irradiar 3-4min. Agregue 3 ml de medio 2LB y luego cultive en una caja negra durante más de 12 horas.
3. La penicilina inactiva el tipo salvaje: tomar 3 ml de líquido bacteriano y centrifugar a 8000 r/min durante 3 minutos para recolectar las bacterias. Añadir 4 ml de solución salina fisiológica y centrifugar tres veces para preparar 3 ml de líquido bacteriano. Tome 0,1 ml, agregue medio básico libre de nitrógeno (5 ml) y cultive a 37°C durante más de 1,2 horas. Luego se añaden 5 ml de medio básico 2 N y una cantidad adecuada de sal sódica de penicilina y se cultiva a 37°C.
4. Detección y cultivo de defectos: Recubrir 0,1 ml de cultivos de 12, 16 y 24 horas (LB, medio mínimo) y cultivar a 37°C durante 36-48 horas. Seleccione el grupo cuyo número de colonias en el medio completo supere con creces el número de colonias en el medio básico. Utilice un palillo estéril para seleccionar 200 colonias que crecen en el medio completo y apúntelas en la placa de medio básico y en la placa de medio completa, respectivamente. . hasta que la línea esté casi completa. Cultivo a 37ºC.
5. Recertificación: Seleccione las colonias en el medio LB que están básicamente ausentes, márquelas en el medio básico para recertificación y guárdelas en el medio completo para su uso posterior. Los que no pasan mucho de las 24 horas son productos defectuosos.
6. Identificación: El tipo defectuoso a detectar se injerta en 10ml de LB y se cultiva a 37°C durante 12-16 horas. Las bacterias se recogieron mediante centrifugación a 8000 rpm durante 3 minutos y luego se centrifugaron y se lavaron con 4 ml de solución salina fisiológica. Hacer 4 ml de suspensión bacteriana. Vierta 1 ml en una placa básica, divida el fondo de la placa en 9 rejillas, use un asa de inoculación para agregar aminoácidos y vitaminas en secuencia, 1 rejilla se usa como control, no agregue ningún nutriente e incube a 37°C durante 2 horas.
Puede que sea más complicado. Lo siento, he hecho todo lo posible.
Si está satisfecho, adoptelo a tiempo. Gracias.
Si tienes dudas, por favor pregunta.