Los métodos de extracción y purificación de ácidos nucleicos son los siguientes:
1. Método de electroforesis: utilice tecnología de electroforesis para separar el ácido nucleico de la mezcla y luego utilice un método determinado para separarlo. Se obtiene así del gel de electroforesis el ácido nucleico purificado.
2. Método de separación centrífuga: utilice la fuerza centrífuga para separar el ácido nucleico del líquido mezclado y luego utilice un método determinado para separarlo del líquido centrífugo para obtener ácido nucleico purificado.
3. Método de hidrólisis: utilice enzimas para hidrolizar los ácidos nucleicos en pequeños fragmentos moleculares y luego utilice un método determinado para separarlos y separarlos para obtener ácidos nucleicos purificados.
4. Método de columna de gel de sílice: Separar los componentes de la solución de ácido nucleico a través de una columna de gel de sílice para obtener ácido nucleico purificado.
5. Método de precipitación con cloroformo: Precipitar los componentes de la solución de ácido nucleico con cloroformo para obtener ácido nucleico purificado.
Qué características de los ácidos nucleicos se utilizan a la hora de extraer ácidos nucleicos
Principios de separación y purificación de ácidos nucleicos: 1. Mantener la integridad de la estructura primaria de las moléculas de ácidos nucleicos porque todo es genético. se almacena la información Entre las estructuras primarias, la estructura primaria de los ácidos nucleicos también determina la forma de su estructura de orden superior y la forma en que se combina con otras macromoléculas biológicas.
2. Principios para aislar ácidos nucleicos: 1) La temperatura no debe ser demasiado alta; 2) Controlar el rango de valores de pH (valor de pH 5-9) Mantener una cierta fuerza iónica; Reducir el impacto mecánico de factores físicos sobre los ácidos nucleicos. Fuerza de corte.
Lo más importante en el aislamiento y extracción de ácidos nucleicos es prevenir la biodegradación de los ácidos nucleicos. Varias nucleasas intracelulares o externas pueden digerir los enlaces fosfodiéster en la cadena de ácidos nucleicos y destruir la estructura primaria del ácido nucleico. El equipo usado y algunos reactivos deben esterilizarse a altas temperaturas y se deben agregar inhibidores de nucleasa al tampón de extracción.
Los inhibidores de la enzima ADN comúnmente utilizados incluyen 1. Agentes quelantes de iones metálicos: como EDTA-Na2 (etilendiaminotetraacetato disódico), 8-hidroxiquinolina. 2. Tensioactivos aniónicos, por ejemplo, SDS, además de inhibir las nucleasas, este. El reactivo también puede desnaturalizar proteínas y combinarse con proteínas desnaturalizadas para formar complejos cargados negativamente, que precipitan en soluciones con alto contenido de sal.
Los inhibidores de la RNasa (ARNasa) comúnmente utilizados son: 1. Bentonita (bentonita) Mecanismo de acción: La bentonita tiene carga negativa y puede adsorber la RNasa y desactivarla 2. DEPC (dietil)pirocarbonato) (C2H5OCOOCOOC2H5) viscoso. líquido, un fuerte inhibidor de la nucleasa. Mecanismo de acción: se une a la proteína His para desnaturalizarla.