Introducción al microscopio
Un microscopio óptico se utiliza para obtener imágenes de muestras que no son claras a simple vista. La gente imagina que se puede utilizar un dispositivo para observar la morfología y la estructura del tejido. espécimen a simple vista. Este dispositivo concebido fue creado por generaciones posteriores. Actualmente se utiliza ampliamente en la observación, medición, análisis, clasificación, identificación, etc. de varios objetos pequeños. El rango de longitud de onda no se limita a la banda de luz visible. (4000~7000) y (>2000) hasta infrarrojos (1~2u), así como observación ocular, microscopía, fotografía y amplificación general del detector de radiación.
Los microscopios se clasifican según el método de iluminación, incluyendo tipo de transmisión y tipo de reflexión (epi-iluminación) Dos tipos. El microscopio de transmisión es un método de iluminación a través de objetos transparentes utilizando iluminación transmitida. El microscopio de reflexión es un método para iluminar objetos opacos desde arriba de la lente del objetivo (epi-iluminación). El método se basa en la diferencia en los métodos de observación y se divide en microscopio de campo brillante, microscopio de campo oscuro, microscopio de contraste de fase, microscopio de polarización, microscopio de contraste de fase de interferencia, microscopio de fluorescencia, etc. Cada microscopio generalmente tiene dos tipos: tipo de transmisión y reflexión. tipo Entre estos microscopios, especialmente el microscopio de campo brillante. El microscopio de campo es la base más básica de todos los microscopios. Se dice que la tasa de transmitancia (absorción) y la reflectividad de los objetos observados a través de este microscopio varían según la ubicación. La intensidad (amplitud) de la luz depende de la iluminación. Los objetos de amplitud y los objetos transparentes incoloros sólo se pueden observar a simple vista cuando cambia la fase de iluminación. Dado que el microscopio de campo brillante no puede cambiar la fase, no se pueden observar muestras transparentes sin teñir. .
Aumento, apertura numérica y número de campos de visión
El aumento completo del microscopio es el producto del aumento de la lente del objetivo G1 y el aumento del ocular G2. G2. G1 es de 1 a 100 veces y G2 es de 5 a 20 veces.
La apertura numérica (N.A.) es el dato básico que determina la resolución, la profundidad focal y el brillo de la imagen de la lente del objetivo. Como se muestra en la figura, cuando la lente objetivo está enfocada, el borde de la lente frontal de la lente objetivo El ángulo entre el rayo de luz inclinado y el eje óptico del microscopio es α, que es el ángulo de semiapertura de. la lente del objetivo Suponiendo que el índice de refracción del espacio de datos de la muestra es n, entonces N.A.=n×sinα.
n suele estar en el aire 1. Cuando se sumerge agua, glicerina o grasa entre el objetivo. lente y la muestra, el índice de refracción de la muestra varía con el líquido de inmersión. Este tipo de lente objetivo se llama lente objetivo de base líquida; si es aire, se llama lente objetivo de sistema seco. la mitad muestra el sistema de inmersión y la mitad derecha muestra el sistema seco.
En un microscopio, el dispositivo que limita el campo de visión es la apertura del campo de visión. El diámetro de esta apertura del campo de visión cuando. visto desde el lado de la lente del objetivo está en mm. El valor representado se denomina número de campo de visión real = campo de visión.
Campo de visión real = número de campos de visión/lente objetivo. aumento
Por ejemplo, si el número del campo de visión es 20, entonces una lente de objetivo de 10× observará un rango de campo de visión de 2 mm. Cuando se utiliza un condensador, el valor N.A. del condensador se determina en función. en la apertura del campo de visión variable, el valor está determinado por la apertura de apertura del condensador variable.
Microscopio de campo oscuro
Dado que el microscopio de campo oscuro no emite luz transparente en la observación directa. En el sistema, cuando no hay ningún objeto, el campo de visión es oscuro y es imposible observar ningún objeto. Cuando hay un objeto, la luz difractada por el objeto y la luz dispersada pueden ser brillantes en el fondo oscuro. Se ha visto que al observar un objeto en un campo oscuro, la mayor parte de la luz de iluminación se refracta. Debido a la ubicación, estructura y grosor del objeto (muestra), la dispersión y refracción de la luz cambian mucho.
Microscopio de diferencia de fase
La estructura de un microscopio de contraste de fase:
Un microscopio de contraste de fase es un microscopio que utiliza el método de contraste de fase. Por lo tanto, requiere los siguientes accesorios adicionales que un. microscopio normal:
(1) Lente objetivo equipada con una placa de fase (placa anular de fase), lente objetivo de contraste de fase.
(2) Lente condensadora equipada con un anillo de fase (placa anular) placa de hendidura), lente condensadora de contraste de fase.
(3) Filtro monocromático (verde).
La descripción del rendimiento de varios componentes es la siguiente:
(1) La placa de fase cambia la fase de la luz directa en 90° y absorbe y debilita la intensidad de la luz; instale una placa de fase en una posición adecuada en el plano focal posterior de la lente del objetivo. La placa de fase debe garantizar el brillo. Para reducir la influencia de la luz difractada, la placa de fase tiene forma de anillo. Placa de fase, fase.
La película de posición y la película de absorción se procesan en la forma que se muestra en la Figura 5.
(2) El anillo de fase (apertura anular) tiene diferentes tamaños según el aumento de cada lente objetivo y se puede reemplazar con un plato giratorio.
(3) El filtro monocromático utiliza un filtro verde con una longitud de onda central de 546 nm (nanómetros). Generalmente se utiliza un filtro monocromático para la observación. La placa de fase utiliza una longitud de onda específica y se mueve 90°. para ver la fase de luz directa. Cuando se requiere una longitud de onda específica, se debe seleccionar un filtro apropiado. Después de insertar el filtro, se mejorará el contraste. Además, el centro de la hendidura anular de fase se debe ajustar a la orientación correcta. antes de la operación. Esta es la función del componente centrador.
Precauciones al usarlo
Al usarlo, las cosas más importantes a las que se debe prestar atención son los siguientes tres puntos:
(1) Realice el método de operación correcto.
(2) Seleccione una lente objetivo de diferencia de fase adecuada de acuerdo con los requisitos de la muestra.
(3) ) Utilice otros métodos de observación para comparar y hacer juicios correctos sobre la muestra.
1. Lo más importante para un funcionamiento correcto debe ser ajustar correctamente el centro del anillo de fase si utiliza varias formas de contenedores. en la Figura 6, no se puede ajustar correctamente a la posición central, por lo que se utiliza para la observación de diferencia de fase.
La evaluación de las imágenes de diferencia de fase es diferente de la evaluación de las imágenes de campo brillante. atención a las características y deficiencias del método de contraste de fase. El método de selección de lentes objetivo de contraste de fase es el mismo que el anterior. La comparación con otros métodos de observación y el método correcto de preparación de muestras son precauciones integrales necesarias al usarlas.
Microscopio de fluorescencia
En un microscopio de fluorescencia, la luz de excitación de una longitud de onda específica debe seleccionarse de la luz de iluminación de la muestra para producir fluorescencia, y luego la fluorescencia debe separarse de la luz mezclada. de la luz de excitación y la fluorescencia para la observación, por lo tanto, al seleccionar una longitud de onda específica, el sistema de filtro juega un papel extremadamente importante.
Principio del microscopio de fluorescencia:
(A) Fuente de luz. : La fuente de luz irradia luz de varias longitudes de onda (desde ultravioleta hasta infrarroja).
(B) Fuente de luz con filtro de excitación: transmite luz de una longitud de onda específica que puede hacer que la muestra produzca fluorescencia, mientras bloquea la luz que es inútil para excitar la fluorescencia.
(C ) Muestras fluorescentes: generalmente teñidas con pigmentos fluorescentes.
(D) Filtro de bloqueo: bloquea la luz de excitación que no es absorbida por la muestra y Transmite selectivamente la fluorescencia. También hay algunas longitudes de onda seleccionadas.