Método de medición de la actividad de las enzimas relacionadas con el metabolismo del ácido cítrico mediante el método de arrodillarse

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Preparación de tampón para el ensayo de citrato sintasa:

Tampón de muestra pH 7,5 100

tris/HCl 50 mM 0,6055 g

KCl 100 mm 0,7455 g

EDTA 1 mm 0,03722 g

Líquido de almacenamiento 1 10 ml

Acetil CoA 2,5 mm 20,225 mg

Solución de almacenamiento 2 10 ml

Oxalacetato (OAA) 5 mM 6,6035 mg

Solución de almacenamiento 3 10 ml

DTNB 5,025 mm 19,914 mg

Pasos: 520 μl de tampón de muestra + 20 μl de TNB + 20 μl de acetil coenzima a + 20 μl de solución de enzima a analizar, incubar a 25 °C durante 5 minutos. Agregue 20 ulOAA e inmediatamente póngalo en un espectrofotómetro con una temperatura constante de 25°C y mida el cambio en la densidad óptica durante 3 minutos a una longitud de onda de 412 nm (registre la densidad óptica cada 30 segundos). Repita la medición a 25°C y tome el valor promedio como valor medido. La unidad de actividad enzimática se expresa en U/min/g.

Cálculo: u/min/g = (Amin-A0). /min/mg (proteína).

Esta fórmula de cálculo no es muy clara.

Este método se deriva de “Cambios adaptativos y mecanismos del músculo cardíaco y del músculo esquelético en ratas sometidas a ejercicio compuesto hipoxia-hipóxico” (Tesis Doctoral de la Tercera Universidad Médica Militar, 2005).