Determinación de la concentración de proteínas mediante el método de Bradford (1) Principio experimental Las obvias deficiencias y muchas limitaciones del método biuret (método Biuret) y del método del reactivo de folin-fenol (método Lowry) han llevado a los científicos a encontrar mejores métodos. Métodos de determinación de soluciones proteicas. El método Coomassie Brilliant Blue (método Bradford), establecido por Bradford en 1976, está diseñado basándose en el principio de combinar proteínas y colorantes. Este método de determinación de proteínas tiene ventajas sobresalientes sobre otros métodos y, por lo tanto, se utiliza ampliamente. Este método es el ensayo de proteínas más sensible disponible actualmente. El tinte Coomassie Brilliant Blue G-250 se combina con proteínas en una solución ácida, lo que hace que la posición del pico de absorción máxima del tinte (?max) cambie de 465 nm a 595 nm, y el color de la solución también cambia de marrón negro a azul. El valor de absorbancia A595 medido a 595 nm es directamente proporcional a la concentración de proteína. Las ventajas destacadas del método Bradford son: (1) Alta sensibilidad, que se estima que es aproximadamente cuatro veces mayor que la del método Lowry, y su cantidad mínima de detección de proteínas puede alcanzar 1 µg. Esto se debe a que el cambio de color producido por la combinación de proteína y tinte es grande. El complejo proteína-tinte tiene un coeficiente de extinción más alto, por lo que el cambio en el valor de absorción de luz con la concentración de proteína es mucho mayor que el del método Lowry. (2) La determinación es rápida y sencilla y sólo se necesita un reactivo. Sólo se necesitan unos 5 minutos para completar la medición de una muestra. Debido al proceso de unión del tinte a la proteína, solo se necesitan unos 2 minutos para completarse, y el color puede permanecer estable en 1 hora, y la estabilidad del color es mejor entre 5 y 20 minutos. Por lo tanto, no es necesario consumir tanto tiempo y controlarlo estrictamente como el método Lowry. (3) Pocas sustancias que interfieran. Los iones K+, Na+, Mg2+, tampón Tris, azúcar y sacarosa, glicerol, mercaptoetanol, EDTA, etc. que interfieren con el método de Lowry no interfieren con este ensayo.