La diferencia entre hibridación in situ fluorescente e inmunofluorescencia:
La hibridación in situ detecta desde el nivel molecular, mientras que la inmunofluorescencia detecta desde el nivel proteico.
La inmunofluorescencia utiliza reacciones antígeno-anticuerpo para localizar sustancias antigénicas en tejidos o células. La hibridación in situ por fluorescencia es un método de mapeo físico que utiliza sondas marcadas con fluoresceína para detectar la hibridación de las sondas con cromosomas en metafase o cromatina en interfase.
Principio de hibridación in situ por fluorescencia:
La tecnología FISH (hibridación in situ por fluorescencia) es una importante tecnología de hibridación in situ no radiactiva. Su principio básico es: si el ADN objetivo en el cromosoma detectado o la sección de fibra de ADN es homólogo y complementario a la sonda de ácido nucleico utilizada, los dos pueden formar el ADN objetivo y la sonda de ácido nucleico después de la desnaturalización-hibridación-renaturalización de los híbridos. Marque un determinado nucleótido de la sonda de ácido nucleico con una molécula indicadora, como biotina o digoxigenina, y se podrá utilizar la molécula indicadora.
Principio de la inmunofluorescencia:
La reacción básica de la inmunología es la reacción antígeno-anticuerpo. Dado que la reacción antígeno-anticuerpo es muy específica, cuando se produce una reacción antígeno-anticuerpo, siempre que se conozca uno de los factores, se puede detectar el otro factor. La tecnología de inmunofluorescencia consiste en marcar el anticuerpo (o antígeno) con un pigmento fluorescente que no afecta la actividad del antígeno y del anticuerpo. Después de combinarlo con el antígeno (o anticuerpo) correspondiente, aparecerá una reacción de fluorescencia específica bajo un microscopio de fluorescencia.