Objetivo del experimento
1. Comprender la especificidad de las enzimas
2. Dominar los métodos y principios para comprobar la especificidad de las enzimas
Principios experimentales
La enzima es un tipo de proteína con función catalítica en los organismos vivos (el concepto tradicional de enzima), es decir, un biocatalizador. La principal diferencia entre esta y los catalizadores generales es que tiene un alto grado. de especificidad (especificidad) La llamada Especificidad significa que una enzima tiene una selectividad estricta por el sustrato sobre el que actúa, es decir, una enzima sólo puede ejercer un determinado efecto catalítico sobre un compuesto o una clase de compuestos (con la misma sustancia química). enlace en su estructura), pero no puede catalizar otros compuestos. La sustancia desempeña un papel catalítico. La especificidad enzimática es una de las características de las enzimas, pero la especificidad mostrada por varias enzimas es muy diferente en grado y se puede dividir en especificidad estructural y. especificidad estereoisomérica.
El almidón y la sacarosa son azúcares no reductores y son sustratos específicos para la amilasa salival y la sacarasa, respectivamente. La amilasa salival puede hidrolizar el almidón para producir maltosa reductora, pero no puede hidrolizar la sacarosa, puede hidrolizar la sacarosa. reduce la glucosa y la fructosa, pero no puede hidrolizar el almidón.
El reactivo de Benedict es una solución de carbonato de sodio que contiene sulfato de cobre y citrato de sodio, que puede oxidar los azúcares reductores en los compuestos correspondientes, mientras que el Cu2+ se reduce a Cu+, es decir, la solución de sulfato de cobre azul se reduce para producir un precipitado de óxido cuproso de color rojo ladrillo. Por lo tanto, el reactivo de Benedict se puede utilizar para comprobar las propiedades reductoras de los productos generados por la hidrólisis de sus respectivos sustratos por las dos enzimas para profundizar la comprensión de. la especificidad de la enzima.
Equipos y reactivos (1) Equipos 1. Baño María a temperatura constante
2. Tubos de ensayo y gradillas para tubos de ensayo
3.Filtro. cubo
4. Pipeta
5. Probeta graduada
6. Vaso de precipitados
7. Centrifugadora (2) Reactivo 1,2% sacarosa
2,1 % de almidón (que contiene 0,3 % de NaCl)
3. Solución de amilasa salival
Primero enjuágate la boca con agua destilada y luego utiliza un tubo de ensayo limpio para tomar saliva (sin espuma)) unos 2ml, diluir 20 veces con agua destilada y reservar.
4. Solución de sacarasa
Tomar 1,0g de levadura seca activa, colocarlo en un mortero. , agregar una pequeña cantidad de agua destilada y arena de cuarzo y triturar. Extraer durante unos 10 minutos, agregar agua destilada hasta un volumen total de unos 20 ml, filtrar o centrifugar y tomar el filtrado o sobrenadante para su uso posterior.
5. Reactivo de Benedict
Disolver 17,4 g de CuSO4 anhidro Disolver en agua caliente a 100 ℃, diluir a 150 ml después de enfriar Añadir 173 g de citrato de sodio y 100 g de Na2CO3 anhidro en 600 ml de agua, calentar y. disolver si la solución está turbia, filtrarla y diluir a 850 ml después de enfriar. Finalmente, agregar la solución de CuSO4. Vierta en la solución de ácido cítrico-Na2CO3 y mezcle (esta solución se puede almacenar durante mucho tiempo).
Pasos experimentales
(1) Especificidad de la amilasa
Tome 5 tubos de ensayo, etiquételos y opere en el orden que figura en la tabla: Tubo de ensayo reactivo número 123 4 51 % solución de almidón (ml) 1,0-1,0-solución de sacarosa al 2% (ml)-1,0-1,0-amilasa salival (ml)- -1.01.01.0 Agua destilada (ml) 1.01.0 - 1,0 Después de agregar los reactivos a cada tubo, colocar Colóquelo en un baño de agua a temperatura constante a 37 ° C durante 10 minutos, luego agregue 2 ml de reactivo de Benedict a cada tubo y luego colóquelo en un baño de agua hirviendo durante 5 minutos. Observe el cambio de color de cada tubo e interprete el experimento. resultados.
(2) Especificidad de la sacarasa
Tome 5 tubos de ensayo, etiquételos y opere en el orden indicado en la tabla: Tubo de ensayo reactivo número 123 Solución de almidón al 451% ( ml) 1.0-1.0-2% solución de sacarosa (ml)-1.0-1.0-Sacarosa (ml)-1.01.01.0 Agua destilada (ml) 1.01.0-1.0 Después de agregar reactivos a cada tubo, colocarlo a una temperatura constante de 37°C Mantenga el baño de agua incubado durante 10 minutos, luego agregue 2 ml de reactivo de Benedict a cada tubo y luego póngalo en el baño de agua hirviendo durante 5 minutos.
Observe el cambio de color de cada tubo y explique los resultados experimentales.
Consejos importantes
1. La sacarosa es un azúcar no reductor típico si el contenido de azúcar reductor en el producto.
Si excede un cierto estándar, mostrará propiedades reductoras y este tipo de sacarosa no se puede usar. Generalmente, la sacarosa utilizada debe verificarse antes del experimento y se deben usar al menos reactivos analíticamente puros.
2. Debido a diferentes personas o a la misma La actividad de la amilasa en la saliva recolectada de individuos en diferentes momentos no es la misma, a veces muy diferente, por lo que el factor de dilución de la saliva se puede ajustar de acuerdo con la actividad de la amilasa salival de cada individuo. , generalmente de 20 a 200 veces.
3. La solución de sacarasa preparada generalmente contiene una pequeña cantidad de impurezas de azúcar reductor, por lo que puede ocurrir una reacción positiva leve. Además, el almidón impuro y la degradación parcial del almidón pueden ocurrir. El proceso de calentamiento también puede provocar una reacción positiva leve.
4. Además de amilasa, la saliva también contiene una pequeña cantidad de maltasa, que puede hidrolizar la maltosa en glucosa.