La preparación de la caseína en la leche y la determinación de su punto isoeléctrico son las siguientes:
1. Principio:
La principal proteína de la leche es la caseína. El contenido es de unos 35 g/l. La caseína es una mezcla de proteínas que contienen fósforo con un punto isoeléctrico de 4,7. Utilizando el principio de que la solubilidad es mínima en el punto isoeléctrico, la caseína precipitará cuando el pH de la leche se ajuste a 4,7. El precipitado se lava con etanol para eliminar las impurezas lipídicas y se puede obtener caseína pura.
2. Materiales, reactivos y equipos:
Materiales: leche fresca. Reactivos: 200 ml de etanol al 95%, 200 ml de éter anhidro, 300 ml de tampón de ácido acético-acetato de sodio 0,2 mol/L, pH 4,7. Electrodomésticos: centrífuga, dispositivo de filtración por succión, papel para prueba de pH de precisión o acidímetro, estufa eléctrica, vaso de precipitados, termómetro.
Primero preparar la solución A y la solución B. Solución A: 0,2mol/L de solución de acetato de sodio Pesar 54,44g de NaAC·3H2O y ajustar el volumen a 2000ml. Líquido B: solución de ácido acético de 0,2 mol/l, pesar 12,0 g de ácido acético puro de calidad superior (contenido superior al 99,8 %) y ajustar el volumen a 1000 ml. Tome 1770 ml de líquido A y 1230 ml de líquido B y mezcle para obtener 3000 ml de tampón de ácido acético-acetato de sodio Ph4.7. Mezcla de etanol-éter etanol:éter = 1:1 (V/V).
3. Pasos de la operación:
1. Extracción cruda de caseína: Calentar 100 ml de leche a 40 °C y agregar lentamente ácido acético precalentado a 40 °C con pH 4,7 mientras se agita. Tampón 100 ml. Ajuste el pH a 4,7 con un papel de prueba de pH de precisión o un medidor de acidez. Enfriar la suspensión anterior a temperatura ambiente, centrifugar durante 15 minutos (3000 r/min) y desechar el líquido transparente para obtener el producto de caseína cruda.
2. Purificación de caseína: lavar el precipitado con agua tres veces, centrifugar durante 10 minutos (3000r/min) y descartar el sobrenadante. Añadir 30 ml de etanol al precipitado y agitar durante un rato, luego transferir toda la suspensión a un embudo Buchner y filtrar con succión. Lavar el precipitado dos veces con una mezcla de etanol-éter. Finalmente, lavar el precipitado con éter dietílico dos veces y escurrirlo, esparcir el precipitado sobre la superficie y secar al aire para obtener proteína caseína pura.
3. Pesaje preciso: calcular contenido y rendimiento. Contenido: caseína g/100mL de leche (g%). El contenido teórico en la fórmula es de 3,5g/100mL de leche.
La medición del punto isoeléctrico de la caseína consiste en utilizar ácido acético y acetato de sodio en la solución de caseína para formar tampones con varios valores de pH. En una solución determinada, cuando la solubilidad de la caseína es mínima, el pH de la solución. El valor de pH es el punto isoeléctrico de la caseína. En el experimento, el valor de pH del tampón debe ser preciso; de lo contrario, se producirán errores y se obtendrán resultados experimentales inexactos. La caseína es una cuajada grande, dura y densa que es extremadamente difícil de digerir y descomponer.