Por problemas de calidad de la plantilla.
1) La extracción de la plantilla está incompleta, no contiene el gen objetivo o el contenido del gen objetivo es demasiado bajo. Puede realizar una electroforesis para ver si hay alguna diferencia obvia entre el ADN extraído y las muestras positivas de PCR y las muestras negativas. Si se determina que este es el problema, puedes intentar aumentar la cantidad de plantillas, pero es posible que no funcione.
2) Algunos componentes del reactivo permanecen en la plantilla, lo que puede inhibir la actividad de la Taq polimerasa. Si este es el caso, se puede utilizar un kit para purificar la plantilla nuevamente, o hacer una dilución en gradiente de la plantilla. plantilla para determinar la cantidad óptima de plantilla.
El instrumento de PCR digital es una herramienta importante para los laboratorios de diagnóstico molecular, que afecta directamente la precisión, repetibilidad e incluso la eficiencia del trabajo de los resultados de las pruebas clínicas. Se utiliza principalmente para la amplificación de genes en investigación científica y aplicaciones clínicas, amplificación de genes por PCR cualitativa, amplificación de genes de ADN cuantitativos de punto final de inmunoensayo enzimático/fluorescencia, chips genéticos y otras aplicaciones de análisis de genes. Es adecuado para diversos kits de PCR nacionales y extranjeros para enfermedades infecciosas. y la investigación científica.
La concentración de la plantilla es demasiado baja:
La temperatura de recocido es demasiado alta. Si es posible, puedes probar una PCR en gradiente.
Cuando la concentración de dNTP es baja, el rendimiento y la especificidad de la PCR aumentan, lo que es adecuado para marcar biotina y elementos radiactivos mediante el método de incorporación de amplificación. Cuando 100 μl de solución de PCR contienen 40 μmol/L de cada dNTP, es suficiente para sintetizar 2,6 μg de ADN (dNTP consume la mitad. Por lo tanto, si accidentalmente agrega 4 veces la cantidad, afectará en gran medida los resultados de la PCR, es decir). , la actividad de la enzima Taq se reducirá entre un 20 y un 30 %, es decir, la inhibición del sustrato.