La secuenciación de alto rendimiento se compara con la secuenciación de primera generación. La secuenciación de primera generación solo puede medir una secuencia de una muestra a la vez y la cantidad de datos generados es relativamente pequeña, mientras que la secuenciación de alto rendimiento. La cantidad de datos que se pueden generar al mismo tiempo oscila entre decenas y cientos de gigabytes, y se pueden medir muchas muestras al mismo tiempo.
En 2000, la secuenciación en instrumentos como 3700 y MegaBace también era una secuenciación de alto rendimiento, en comparación con la secuenciación manual o la ejecución de geles en placa.
Sin embargo, después de 2005, la secuenciación de alto rendimiento cambió a secuenciación de segunda generación (secuenciación de próxima generación) y secuenciación de segunda generación como 454, Solexa (posteriormente cambiada a Illumina) y SOLiD, en comparación con 3730. y así sucesivamente. El rendimiento de la secuenciación de primera generación se ha incrementado en decenas de miles o incluso cientos de millones de veces, por lo que se denomina secuenciación de alto rendimiento. Información ampliada
Principio:
El esquema de secuenciación se basa en el método de secuenciación didesoxi (Sanger et al., 1977). Para secuenciar pares de insertos de cada clon, cada placa de ADN molde de plásmido debe estar equipada con dos placas de reacción de secuenciación de ciclo de 384 pocillos. La reacción de secuenciación utiliza la versión química 3.1 de Big Dye Terminator (AppliedBiosystems) y el estándar M13 o cebadores directos e inversos de uso común. Las reacciones de secuenciación se configuraron utilizando una estación de trabajo de pipeteo BiomekFX (Beckman).
El brazo robótico es responsable de dividir en alícuotas la muestra plantilla y mezclarla con la solución de reacción. La solución de reacción contiene didesoxinucleótidos, nucleótidos marcados con fluorescencia, TaqDNA polimerasa, cebadores de secuencia y tampones. Las plantillas y las placas de reacción tienen códigos de barras y se rastrean mediante un lector de códigos de barras en la estación de trabajo de pipeteo BiomekFX para garantizar una transferencia sin errores de plantillas y soluciones de reacción. Se realizaron de 30 a 40 ciclos consecutivos de pasos de amplificación lineal en MJ Research Tetrads o en un termociclador 9700 (Application Biosystems).
Enciclopedia Baidu-Secuenciación de alto rendimiento del genoma