El principio de la electroforesis en gel de agarosa: el gel de agarosa tiene una estructura de red y las moléculas del material encontrarán resistencia cuando pasen. Los materiales de macromoléculas encontrarán una gran resistencia cuando surjan.
La electroforesis en gel de agarosa es un método de electroforesis que utiliza agar o agarosa como medio de soporte. Para muestras con pesos moleculares más grandes, como ácidos nucleicos macromoleculares, virus, etc., generalmente se pueden usar geles de agarosa con tamaños de poro más grandes para la separación electroforética. El principio se basa en la diferente movilidad de las moléculas de ADN en un campo eléctrico. En un gel de agarosa, las moléculas de ADN se mueven en un campo eléctrico según su tamaño y carga. Cuanto más grande es la molécula de ADN, menor es su movilidad; por el contrario, las moléculas de ADN más pequeñas tienen una mayor movilidad.
Cuando las moléculas de ADN pasan a través de un gel de agarosa, son movidas por la influencia de un campo eléctrico. Debido a que las moléculas de ADN de diferentes tamaños se mueven a través del gel a diferentes velocidades, pasan a través del gel en diferentes momentos. De esta forma, las moléculas de ADN de diferentes tamaños se separan en diferentes bandas.
Al observar estas bandas, podemos determinar el número y la distribución del tamaño de las moléculas de ADN en la muestra. Esto resulta útil para el análisis y la identificación del ADN, por ejemplo en la clonación de genes, la secuenciación del ADN, el diagnóstico genético y la investigación biotecnológica. La electroforesis en gel de agarosa se utiliza ampliamente en el campo biomédico debido a su alta resolución y precisión.
Proceso de operación de electroforesis en gel de agarosa
1. Método de electroforesis
La detección general de ácido nucleico solo requiere electroforesis en gel de agarosa si necesita distinguir, debe realizarse la electroforesis en gel de poliacrilamida; Se utiliza para electroforesis con alta eficiencia, especialmente si la diferencia es de solo unos pocos pb. Para cadenas de ADN enormes que no son adecuadas para la electroforesis ordinaria, se debe utilizar electroforesis en gel pulsado. Tenga en cuenta que es posible que las grandes hebras de ADN no escapen de los poros del gel mediante electroforesis ordinaria, lo que da como resultado bandas faltantes.
2. Concentración del gel
Para la electroforesis en gel de agarosa, la concentración suele estar entre 0,5 y 2. Para la electroforesis de grandes fragmentos de ácidos nucleicos se utilizan concentraciones bajas y concentraciones altas. para electroforesis de grandes fragmentos de ácidos nucleicos. Se utiliza para análisis de fragmentos pequeños. Los geles de baja concentración son frágiles, por lo que las soluciones son una manipulación cuidadosa y el uso de agarosa de buena calidad. Tenga en cuenta que el gel de alta concentración puede dificultar la distinción de bandas de ADN con tamaños moleculares similares, lo que provoca que falten bandas.