Gen diana: fragmento del gen que se va a amplificar.
Desnaturalización: Consiste en fundir las dobles hebras en un ambiente de alta temperatura, normalmente 94 grados centígrados.
Cebador: Fragmento de ARN monocatenario que guía el inicio de la replicación.
Polimerasa: La enzima Taq es una enzima resistente al calor que se encuentra en los cráteres volcánicos. Bajo su acción, se utilizan cuatro desoxirribonucleótidos (dNTP) como materia prima para la síntesis de dobles hebras.
Extensión: En términos generales, es el proceso en el que la hebra plantilla original y la hebra simple recién sintetizada forman una nueva doble hebra. La duración del tiempo de extensión y la temperatura afectarán la calidad del nuevo dúplex.
Proceso general de PCR
1. ADN molde
2. (Primer ciclo): Desnaturalización del ADN molde y renaturalización del cebador.
3. (Primera ronda): Extensión de cebadores
4. (Segundo ciclo): Desnaturalización de dobles hebras recién sintetizadas y renaturalización de cebadores.
5. (Segundo ciclo): Extensión del primer.
……
Y así hasta el final.
Después, puedes sumergirlo en electroforesis de agarosa para ver la situación de amplificación, o puedes medir el valor de OD para calcular la concentración.
Ahora existen la PCR en tiempo real y la PCR cuantitativa en tiempo real, que pueden medir la concentración de reactivos a intervalos iguales y obtener datos relativamente precisos, lo cual es relativamente simple.
En general, hacer experimentos de biología molecular es un trabajo costoso.