El segmento de línea recta en la Figura 1 se descompone de la siguiente manera.
- B B - H H - B B -
- B B - H H - B B -
1 2 3 4
(2) Como Como se muestra arriba, siempre que los extremos adhesivos del mismo sitio de restricción puedan ser complementarios.
Primero observe los sitios de restricción de estas dos enzimas en el plásmido, de modo que el plásmido se corte en dos pedazos, pero el fragmento efectivo es un fragmento largo (el padre madre del plásmido de fragmento largo que se muestra en la imagen puede pasar separada por electroforesis).
El llamado plásmido "recombinante" se refiere a un plásmido en el que se inserta un fragmento extraño en el medio del fragmento del plásmido (padre).
De esta manera, si el plásmido del fragmento largo cortado y el fragmento lineal se mezclan, tanto el fragmento 2 como el fragmento 3 pueden recombinarse con el plásmido y se pueden obtener dos plásmidos después del cribado. Por supuesto, existen otras posibilidades, como que el fragmento 2 y el fragmento 3 se conecten nuevamente para formar un fragmento binario, pero dicho fragmento no se puede obtener mediante el cribado. La autoligación del plásmido se producirá y se examinará, pero se puede identificar mediante el cribado. detección adicional del tamaño del plásmido.
De hecho, esta pregunta es demasiado absoluta. Teóricamente es posible que los fragmentos 2 y 3 se concatenaran entre sí y luego se ligaran al plásmido. Aunque la probabilidad es baja, es imposible no saberlo. De cualquier manera, será reconocido. Generalmente se considera demasiado complejo formular dos consideraciones.
Si en su lugar se utiliza Bst l y BamH l, equivale a una única restricción (porque los sitios de restricción de las dos enzimas son los mismos), por lo que
1) El plásmido utiliza un corte de puerto (dos extremos adhesivos).
2) Corte el fragmento lineal en tres segmentos (intente dibujarlo usted mismo). Solo el segmento medio con extremos adhesivos se puede recombinar con el plásmido.
Cuando 1) y 2) se mezclan y los extremos adhesivos se conectan entre sí, solo se puede formar un plásmido recombinante.