Las razones de la irregularidad son las siguientes
1. Después de sacar el papel, debe colocarse a temperatura ambiente durante 10 minutos antes de abrirlo, de lo contrario, la humedad en el aire. se condensará en el papel y se disolverá fácilmente, lo que hará que el medicamento se vuelva ineficaz.
2. Utilice una placa plana de 90 cm de diámetro, viértala sobre una mesa estéril horizontal y mida con precisión 25 ml de la solución de agar M2H esterilizada en autoclave para que la placa de agar tenga un espesor de 4 mm. De lo contrario, si el espesor es demasiado alto, el volumen de difusión hemisférica de la hoja de papel que contiene el fármaco aumentará, dando lugar a una falsa resistencia al fármaco y, a la inversa, a una falsa sensibilidad;
3. Prepare las bacterias en una suspensión bacteriana, sumérjalas en el líquido bacteriano con un hisopo de algodón esterilizado, exprima el exceso de líquido bacteriano en la pared del tubo y cubra toda la superficie de la placa M2H. Repita 3. veces, girando la placa 60 grados cada vez para asegurar un recubrimiento uniforme y las colonias estarán en un estado semiconfluente después del cultivo a 35 °C; de lo contrario, los resultados de susceptibilidad al fármaco se verán afectados.
Otros métodos
E-test
E-test se refiere a la prueba de difusión de agar con gradiente de concentración. Su principio es básicamente el mismo que el método de difusión, es decir. es decir, la concentración es El gradiente continuo de fármacos antibacterianos se difunde desde la tira reactiva de plástico hacia el agar y el crecimiento de las bacterias de prueba se inhibe dentro del rango de concentración inhibidora alrededor de la tira reactiva, formando así una zona de inhibición transparente. La prueba E combina los principios y características del método de dilución y el método de difusión, y también compensa algunas deficiencias de los dos métodos. Puede medir directa y cuantitativamente la CIM de los medicamentos antibacterianos frente a las bacterias de prueba como el método de dilución.
Preparación e inoculación del medio de cultivo y líquido bacteriano
3.1. La preparación e inoculación del medio de cultivo, líquido bacteriano y la inoculación son los mismos que el método de difusión en disco.
Coloque la tira reactiva E
3.2. La colocación de la tira reactiva E es igual que el método de difusión de papel. El lado de la escala de la tira reactiva E mira hacia arriba y no debe colocarse. hacia atrás. Una vez que entre en contacto con el agar no se debe mover. Se pueden colocar seis tiras reactivas E en un plato plano con un diámetro de 150 mm y, por lo general, solo se puede colocar una en un plato con un diámetro de 90 mm.
Tiempo y temperatura de incubación
3.3. El tiempo y la temperatura de incubación son los mismos que el método de difusión en disco.
Después de la incubación, se puede formar una zona de inhibición elíptica alrededor de la tira reactiva. La escala de lectura en la tira reactiva en la intersección de la sección transversal de la zona de inhibición y la tira reactiva es la determinación del efecto de. el fármaco antibacteriano en la MIC de la prueba. Para cuestiones a las que se debe prestar atención al leer, consulte las instrucciones del producto del proveedor
Método de dilución en microcaldo
Medicamentos antimicrobianos y preparación del medio de cultivo
1.2. 1. Medicamentos antimicrobianos La preparación del medio de cultivo es la misma que el método de dilución constante en caldo.
Preparación de la placa MIC
1.2.2. La preparación de la placa MIC se realiza de forma aséptica. Agregue soluciones diluidas de fármacos antibacterianos de diferentes concentraciones a poliestireno esterilizado de 96 pocillos. de solución de fármaco a los pocillos 1 a 11. No se añade ningún fármaco al pocillo 12 como control de crecimiento. La solución se liofiliza y se sella, y se almacena por debajo de -20ºC para su uso posterior.
Preparación del inóculo
1.2.3. La preparación del inóculo utilizará el método de crecimiento o el método de suspensión bacteriana directa para preparar una suspensión bacteriana con una concentración equivalente al estándar turbidimétrico de McFarland 0,5 después de diluir. Caldo MH 1:1000, añadir 100 µl a cada pocillo, sellar y colocar en una incubadora de aire normal a 35 °C e incubar durante 16 a 20 horas para determinar el resultado. Cuando se prueban Haemophilus y Streptococcus, el tiempo de incubación es de 20 a 24 horas. Cuando se realizan pruebas de sensibilidad de Staphylococcus y Enterococcus a oxacilina y vancomicina, el tiempo de incubación debe ser de 24 horas. En este momento, las concentraciones de fármaco en los pocillos 1 a 11 son 128, 64, 32, 16, 8, 4, 2, 1, 0,5, 0,25 y 0,125 μg/ml respectivamente.
Juicio de resultado
1.2.4 Juicio de resultado La concentración más baja del fármaco que inhibe completamente el crecimiento bacteriano en el orificio pequeño es la MIC. La prueba sólo es significativa cuando el crecimiento bacteriano es evidente en los pocillos de control positivo (es decir, sin antibióticos). Cuando se detecta un solo pocillo en el método de microdilución en caldo, se debe registrar la concentración más alta del fármaco que inhibe el crecimiento bacteriano. Si aparecen múltiples agujeros, no se deben informar los resultados y se debe repetir la prueba. Generalmente, para los bacilos gramnegativos, la CIM medida mediante el método de dilución en microcaldo es la misma o una dilución menor (1 pocillo o 2 veces) que la medida mediante el método de dilución en macrocaldo.
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