Kawasaki propuso un método similar para detectar ligandos peptídicos a partir de bibliotecas de péptidos. Anteriormente, el ARNm acoplado a ribosomas y polipéptidos se había aislado mediante inmunoprecipitación utilizando anticuerpos contra el polipéptido inicial. Mattheakis et al. pusieron en práctica las ideas anteriores por primera vez y establecieron una tecnología de visualización de polirribosomas para detectar ligandos peptídicos. A partir de una biblioteca de péptidos con una capacidad de almacenamiento de 10 12, se seleccionaron ligandos polipeptídicos con anticuerpos monoclonales inmovilizados que tenían una constante de afinidad de 10 9 (nivel nmol nmol). Gersuk et al. también utilizaron esta técnica para detectar ligandos peptídicos en busca de marcadores tumorales de cáncer de próstata. En la traducción in vitro, el plegamiento y la traducción de proteínas o polipéptidos están sincronizados. Los polipéptidos naturales que se unen a los ribosomas también tienen actividad enzimática. Estos resultados indican que si el plegamiento de proteínas no se ve afectado por los canales ribosómicos de proteínas, la disociación de los ribosomas no es necesaria para que la proteína adquiera su conformación nativa. En 1997, basándose en los resultados de la investigación anterior, el laboratorio Plückthun mejoró la tecnología de visualización de polisomas de Mattheakis y estableció una nueva tecnología para la detección in vitro de claras de huevo funcionales completas (como anticuerpos): tecnología de visualización de ribosomas.
Principios de la tecnología de visualización de ribosomas
La tecnología de visualización de ribosomas amplifica las bibliotecas de ADN mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), al tiempo que introduce el promotor T7, el sitio de unión del ribosoma y la estructura del bucle del tallo, se transcribe en ARNm y se traduce en un sistema de traducción libre de células para lograr la traducción del gen objetivo. El producto se muestra en la superficie del ribosoma, formando un complejo "ARNm-ribosoma-proteína", que constituye una biblioteca de proteínas exhibidas en ribosomas. A continuación se selecciona el antígeno correspondiente a partir de la mezcla de traducción y se aísla el ARNm del complejo de ribosomas unidos utilizando EDTA o se eluye todo el complejo con el antígeno específico. La reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa (RT-PCR) se utiliza para proporcionar una plantilla para la siguiente ronda de visualización. El ADN obtenido entrará en la siguiente ronda de enriquecimiento y parte del ADN se puede clonar para el análisis de secuenciación.