(2) Preparación de sondas: Las sondas se refieren a fragmentos de ácido nucleico que pueden unirse a las moléculas de ácido nucleico que se van a analizar según el principio de emparejamiento de bases. Puede ser un trozo de ADN, ARN o un oligonucleótido sintético. En los experimentos de hibridación de ácidos nucleicos, las sondas deben marcarse con elementos o moléculas directamente detectables. De esta manera, al aislar las moléculas sonda unidas a las moléculas de ácido nucleico en la membrana Yin En, no solo se determina la posición del fragmento de ácido nucleico detectado en la membrana, es decir, la posición en el gel de electroforesis, sino también su tamaño molecular. se puede conocer.
(3) Hibridación: primero, se requiere una prehibridación, es decir, se utiliza una solución de ácido nucleico no específica para bloquear los sitios de unión no específicos en la membrana. Debido a que las moléculas de ácido nucleico transferidas a la membrana ya son moléculas desnaturalizadas, solo es necesario desnaturalizar la sonda marcada durante el proceso de hibridación, luego dejar que la sonda reaccione con la membrana a una temperatura específica y luego lavar las moléculas de la sonda no unidas. .
(4) Detección: Dependiendo del método de etiquetado de la sonda, el método de detección también es diferente. Las sondas marcadas con radioisótopos requieren autorradiografía para detectar su ubicación en la membrana; sin embargo, si la sonda está marcada con métodos no isotópicos como la biotina, se requieren los métodos inmunohistoquímicos correspondientes para la detección;