ADN endógeno silencioso
Sde4, que descubrimos previamente en Arabidopsis thaliana.
La parte mostrada en la teoría de las mutaciones ha perdido su brillo transgénico.
La ruta es dependiente por lo demás.
ARN polimerasa dependiente de ARN de seis días
(rdr6)(1).sde4 plantas mutantes también
ARN pequeño de interferencia defectuoso (small interfering RNA)
p>
Producción y antielementos metil seno
Atsn1 (2) sigue el camino.
Tres días asociados con rdr2 y Dicer
(dcl3) y otros ARNip endógenos (3).
Posiblemente, este camino de silencio esté relacionado.
La interferencia de ARN (tecnología RNAi) media la heterocromatinización.
En la levadura de fisión
Pombe, que también se basa en el pequeño ARN de interferencia, Dicer,
Capítulo 4. Así que a investigar.
Ambos transgenes de mecánica y retroelementos
Silenciando las moléculas que estudiamos.
La trayectoria de la identidad de Sde4. Lo que aquí describimos.
Cómo se codifica la subunidad 1 más grande en sde4
La codificación de la ARN polimerasa es diferente de
Una, dos y tres ARN polimerasas en células eucariotas Enzimas
(Las subunidades se designan en Arabidopsis thaliana.
Por el prefijo nrpa, nrpb o nrpc respectivamente).
Denominada ARN polimerasa de acuerdo con el Convenio
A partir de ahora nos referiremos a ella
Esta enzima se utiliza como ARN polimerasa IV (oleaginosa)
(4) El código de subunidad más grande del mundo, sde4.
Como nrpd1a. Sde4 como se describió anteriormente.
La mutación ahora se denomina nrpd1a-1.
Laboratorio Sainsbury, Centro John de Arquitectura, Norwich, 1.
Reino Unido Nr4 7uh. 2Universidad de Norwich de East Anglia
Reino Unido Nr4 7tj.
*A quién se deben enviar las comunicaciones.
Correo electrónico: David . baul combe @ It's Sainsbury-laboratory AC .
Mutantes defectuosos en la pantalla, trans
Se utilizaron líneas de Nantana Mustard. silenciamiento genético.
(gxa), en el que el transgén de la proteína verde fluorescente
(GFP) (Fig. s1a, denominada G)
es silencioso, causado por el virus de la papa. Transgén de proteína fluorescente verde X (pvx) (Fig. s1a, nombre 1) (1). A diferencia del mutante Rdr6, en el que la proteína verde fluorescente se pierde por completo.
Silencioso al fondo de Gxa, nrpd1a-1
Una imagen que muestra un ataque retardado en silencio
Plantas en el punto de crecimiento (Fig. 1A y Fig.
s1f ) (1). En las plántulas, durante las primeras etapas de las hojas
aparece la fluorescencia de la proteína verde fluorescente y, al cabo de una semana,
es. silenciosa Aparece en zonas localizadas y luego se dispersa por toda la hoja. Este fenotipo
tardío persiste hasta la floración.
Las inflorescencias jóvenes son todas fluorescentes GFP.
El ARNm transgénico de este modelo
Las pequeñas moléculas interferirán en consecuencia con la acumulación de ARN
La cantidad de fluorescencia de la proteína verde fluorescente. Así, North
El análisis de flores de tipo salvaje y nrpd1a-1
sugiere un aumento en la GFP acumulada.
Expresión de ARNm (4,5 veces) y ARN del gen de la proteína fluorescente pvx-verde.
Nrpd1a-1 corresponde a una reducción de seis veces.
ARNip de proteína fluorescente verde de nucleótidos (nt) de 21 a 24 días (Fig.
1B) en relación con el tipo salvaje. Silencio total
Se va Rose, donde nrpd1a media en la pérdida.
El silencio no es significativamente mayor.
Cantidades de flores, gen de la proteína verde fluorescente y ARNip
Comparables.
La metilación del ADN mediada por ARN (rddm)
es silenciosa en las plantas y
una posible pequeña molécula interfiere con la guía del ARN.
Complejo. Rddm consistente en la proteína verde fluorescente
En plantas gxa, la trayectoria de metilación del ADN del gen de la proteína verde fluorescente es
Rdr6 y los mutantes sgs3 se pierden en las flores
23. LP Faihofer et al., Williams Año. Mediterráneo. 197, 1525 (2003).
24. Spoonegawa et al., actualmente. biología. 13, 1252 (2003).
25. Con el respaldo del NHS (r37-ai33443). Creemos
Gracias, J. Porber, Diez nietos por hora y D. Rothstein.
Lea atentamente este manuscrito y Tenth Forest (Universidad
Buffalo), para poder compartir los defectos de la tarjeta 11.
Células Julkat. Los datos de interacción molecular se han depositado
en la base de datos de Biomolecular Interaction Network
y los códigos de acceso 209039 a 209044.
Materiales de soporte en línea
www. science mag org/CGI/content/full/308/5718/114/
Flash TTL inalámbrico
Materiales y métodos
Figuras 1 a 3
165438+4 de octubre de 2004 Aceptado, 65438 de junio+65438 de octubre+abril de 2005
10.1126 /Science.1107107
ARNip (1) con proteína verde fluorescente (Fig. 1 C). En nrpd1a-1
El ARNip de flores, como la proteína fluorescente verde, está disminuido pero no
ausente y solo encontramos un pequeño cambio
patrón de metilación del ADN verde. de proteínas fluorescentes (Figura 1 C)
Este contraste es una pérdida más obvia.
Metilación del ADN de Atsn1 en plantas nrpd1a-1
( 2 , 5 ). Entonces, canal nrpd1a, ¿no?
El único ARNip adecuado es rddm.
Al principio, nrpd1a-1 estaba bastante reordenado.
Trastorno del cromosoma 1
At1g63020 (uno, dos a siete en la imagen), luego usar.
Otros alelos de nrpd1a y.
Confirmado con nrpd1a
Este gen codifica para nrpd1a. Secuencia
No alineación de nrpd1a y Arabidopsis nrpd1a
Homología (código at2g40030) y dos
proteínas exclusivas del arroz.
ARN que se ramifica en la subunidad más grande
polimerasa (Fig. 2A y fig. s2, a a c).
Con razón nrpd1a es el más grande del mundo.
Subunidad-múltiples subunidades aceite cuatro, arroz
El genoma de Arabidopsis codifica dos.
La proteína puede ser la segunda más grande.
Subunidades (at3g18090 y at3g23780) (6)
(Figura 2B y Figura s2d). Para probar el papel de estos genes mudos en las subunidades nrpd2 de Arabidopsis, transformamos Gxa de tipo salvaje.
Construcción de secuencias repetidas invertidas de plantas
ARNi dirigido a nrpd1a, gen sospechoso
Nrpd2 o Adan (como control) (Figura 3,
p >a y b). El cambio y el silenciamiento de inicio retardado de IR se produjeron para los genes nrpd1a y los genes sospechosos
Nrpd2, pero no para Adan (Fig. 3, C
y d).
Tal nrpd1a-1.
Aunque estarán inactivados los dos genes nrpd2
, construidos por rayos infrarrojos.
(Figura s3b), la evidencia de dos rutas muestra que
la trayectoria activa nrpd2 no está en 3g23780.
Comparado con at3g18090. Primero, el análisis de reversión genética específica
reacción en cadena de la polimerasa transcripcional (RT-PCR)
mostró que la mayoría de nrpd2
se originó a partir de at3g23780 (Figura S3E)
En segundo lugar, se insertó un mutante at3g23780.
(nrpd2a-1, Figura s3f), no en3g18090.
(nrpd2b-1, Figura S3F) elimina las fuentes endógenas.
Pequeño ARN interferencial (Figura 3A).
nrpd1a y nrpd2 tienen similitudes y diferencias en secuencia.
Sus nrpa, nrpb, nrpc
Homólogos, funciones correspondientes en esta región
Propiedades importantes de la ARN polimerasa de levadura
1 de abril de 2005 Volumen 1 308 www.sciencemag.org Ciencia
Informe
Fig. 1. GFP silencia nrpd1a-(1)1. Fotografías ultravioleta de plantas con flores gxa de tipo salvaje (WT) y nrpd1a-1. (2) Análisis Northern de la proteína verde fluorescente
La expresión de ARNm y ARNip en flores (VI), tallos (S) y hojas (1) consiste en WT y ARNip.
Nrpd1a-1 fábrica gxa. (3) Análisis de transferencia Southern y purificación de ADN genómico.
Dos (7). Para nrpd1a, región e identidad
Nrpb1 incluye un núcleo de abrazadera N-terminal.
(20%), sitio de unión al metal zinc, activo.
Sitio web (41%), embudos y algunas grietas
Dominios (inicial, 42%, eliminación final, 24%). ¿Debería
El dominio de interrupción en nrpa1,
Nrpb1 y nrpc1 eliminarse en nrpd1a?
(Región conservada 7) (Fig. s2b). Sin embargo,
el núcleo de abrazadera C-terminal (Figura S2B), que define
antes del final del dominio globular
el dominio C-terminal (CTD) de nrpb1 ( 7), es
actualmente (23% idéntico). Nrpd2 es 34% idéntico.
Existen regiones nrpb2 y conservadas.
El sitio de unión correspondiente es muy pequeño.
Subunidades principales (nrpb3/ac40, nrpb10,
Nrpb12) (Figura s2d), así es como entra en juego la idea.
Actúa sobre los componentes enzimáticos (7). Hay múltiples
genes nrpb3/ac40 y algunas empresas
pueden conocer los detalles de Petroleum IV. Sin embargo, para
nrpb10 y nrpb12 sólo hay dos genes.
Cada uno de Arabidopsis, puede compartir.
Entre la cuarta y otras ARN polimerasas en semillas oleaginosas.
Porque están en otros eucariotas (8).
La diferencia más significativa
Nrpb1 y nrpd1a se encuentran en el extremo C.
Nrpd1, como el arroz y Arabidopsis.
Las proteínas tienen un extremo C similar.
La mitad de la proteína no codificada (cloroplastos y hojas defectuosas
) regula los genes S rRNA.
Procesamiento de cloroplastos (9) (Fig. s2a). Esta extensión c-terminal coordina la actividad de la ARN polimerasa y los pasos de procesamiento posteriores para parecerse al CTD de la polii (8). . Libro de combinación
Características conservadas y C-terminal inusuales
La ARN polimerasa sensorial muestra que Polonia IV es.
ARN polimerasas activas y sus diferencias importantes
Una, dos y tres de las ARN polimerasas sentido.
Del mismo tejido que en el punto (2), digestión y sensibilidad a la metilación.
Se descubrió que la enzima sau96i era GFP. Se utilizaron como controles las líneas G no metiladas y gxa sgs3. Los fragmentos de ADN son más grandes que NT$554 debido al ADN.
Metilación.
Figura. 2. Árbol filogenético
La familia de subunidades de la polimerasa más grande (a) y
la segunda más grande
De plantas, gusanos y
Levadura. A la derecha
ARN
subfamilia gris de polimerasa
y cuadro negro se muestran para cada árbol.
Cuatro subunidades de aceite de Arabidopsis.
Con el fin de explorar más a fondo el mecanismo de producción de petróleo.
Silenciamiento mediado por cuatro, otra característica que tenemos es
mutación y silenciamiento retardado de GFP
(Figura s4a). Tiene un cromosoma 4 invertido.
Esto alterará rdr2 (Fig. s4b, rdr2-3) y
puede complementar el fenotipo silenciador del gen de la proteína verde fluorescente.
Al transformar
ADN genómico con rdr2 de tipo salvaje (Fig. s4a). mutar aquí porque cada mutación nrpd1a en nrpd2a-1 y
obtiene una menor cantidad de NT$24 endógenos.
ARNip (es decir, atsn1, 1003, 02 y grupo 2) y
en tipo salvaje, mientras que cantidad de mir167.
No se ve afectado en (3) (Figura 3A). Estos ARNip cuestan alrededor de NT$24 y dcl3 Dicer es un estudiante involucrado (3). Es posible.
Por lo tanto, los métodos oil four, rdr2 y dcl3
se unen de forma silenciosa. Oil Four Generals
Las especies de ARN producidas se copian a
ARN bicatenario (RNA bicatenario) rdr2.
Este ARN bicatenario luego se procesa en
pequeñas moléculas que interfieren con el ARN a través de dcl3.
Las mutaciones en rdr2 y rdp1 también
transmiten loci de genes de ARN de interferencia de moléculas pequeñas y ARN a largo plazo.
Sin embargo, el efecto contrario en moléculas pequeñas puede interferir con el ARN,
el ARN a largo plazo es más abundante en el silenciamiento.
Mutantes. Por tanto, hay más ARN atsn1.
Enriquecido en mutantes nrpd1a y rdr2.
En plantas de tipo salvaje (Fig. 3 C), demostrando
que no son transcritos de aceite. Presumiblemente, el resultado de este ARN debe ser determinado por la transcripción de la ARN polimerasa III (10) atsn1 que se silencia.
La vía tetra-rdr2-dcl3 en las plantas oleaginosas es de tipo salvaje.
Plantas. No podemos detectarlo, solo aceite cuatro.
Atsn1 especula que esto se debe a que
sus bajos números actuales
son producidos por ARN enmascarados y más abundantes.
Otras ARN polimerasas.
Es relevante la vía 4-rd 2-DC L3 de este aceite.
A diferencia del grupo 2 y los ARNip de 2002, no es necesario.
Ago4 o metilación del ADN (3). Sin embargo,
atsn1 y 1003 están altamente metilados.
Entre las plantas de tipo silvestre, nrpd1a tiene 10.000 acres.
Www.sciencemag.org Ciencia Volumen 308 1 de abril de 2005
Informe
Fig. 3. Los indicadores moleculares guardan silencio. (1) Analizar la posición del Norte en los días 9 y 9; 10 carriles, nrpd1a-3, carril 11, nrpd 1a-4, nrpd2a-1, 13 carriles;
ARN pequeño endógeno: carriles 1 a 8, fondo gxa (C24); carril 9 a nrpd2b-1. La mancha se eliminó y se repintó varias veces.
(2) Zona Sur
13, fondo del teniente coronel-O. Línea 1, por gramo carril 2, línea rdr2-3, 3 repeticiones de ADNr de Wuchang, 4 repeticiones, 2 repeticiones cubiertas por nrpd1a Digestión de una variedad de alelos y comparación con digestiones de otros alelos.
Línea calificadora RDR2-3 RDR2P::RDR2T2 independiente; carril 5, nrpd 1a-1; carriles 6 y 7, enzima sensible a la metilación hpaii. (C) Análisis de RT-PCR endógena Dos líneas calificadas NRPD 1A-1 NRPD 1AP::NRPD 1T 2 independientes; Carril 8 NRPD 1A-2 es RDR2-2 y mutantes con nrpd1a elevado.
Tants (Figura 3B), se acumulan solos.
Los ARNip dependen de proteínas argonautas.
Ago4, ADN metiltransferasa de novo
Drm1 y DRM 2 (números 5, 11 y 12), y aceite.
Cuatro. En estos ejemplos parece que ya lo planteamos en la primera Pompeya.
(13), es decir, permanecer en silencio implica
el camino hacia el silencio que se refuerza a sí mismo.
La producción de ARNip mediada por IV de la semilla oleaginosa es dependiente.
Acerca de la metilación del ADN mediada por ago4
Y viceversa.
Aquí es posible, como se describe en el Volumen 4
Resolver una paradoja en el silenciamiento de la cromatina
El mecanismo se basa en el ARN. Si
la transcripción del gen silenciado se realiza mediante una única
polimerasa, este mecanismo dependiente de ARN
no se estabilizará mediante la represión
de La transcripción de estos sitios también da como resultado la pérdida del ARN silenciador.
Sin embargo, silenciando imágenes específicas de la polimerasa
Oil IV puede resistir las modificaciones de la cromatina o del ADN
que afectan a las polimerasas uno a tres.
Por analogía, puedes permanecer en silencio de forma constante.
Estado. Las cuatro ramas del petróleo están ausentes en animales y hongos, pero la paradoja del silencio podría resolverse si existiera una forma de ARN.
Polimerasa 1-3 y especificidad de silenciamiento
subunidades que permiten la transcripción de la heterocromatina
Por tanto, mantenimiento
silenciamiento dependiente de ARN.
Finalmente, silencio general.
El mecanismo es cruzado GFP.
Silenciamiento génico y ARNip endógeno
El camino hacia el silenciamiento es dependiente.
Para proteínas *** y de alianza (Figura 1018). En las hojas de rosas
Estas dos vías de silenciamiento en las plantas
son independientes entre sí porque
el silenciamiento del gen no se ve afectado por rdr2 (Figura 1018).
Debido a la persistencia de ARNip 24nt endógeno
plantas en rdr6 (2). Sin embargo, en estas flores
por la proteína verde fluorescente.
El silencio se ve afectado tanto por rdr2 como por rdr6.
Esta posible vía silenciosa interactúa,
se combina con sus propias capacidades para formar
retroalimentación y bucles de autorrefuerzo (14), explicado
Potencial complejidad endógena
SiRNAs implicados en redes regulatorias.
Referencias y Fianzas
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Baulcombe, Cell 101.543 (2000).
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13. Una cucharada por hora.
Keim, Garford, cuatro moez, primero.
Grewal, Proc. Natural.acad.Secretaria de Industria y Comercio. Estados Unidos 102, 152 (2005).
14. Naturaleza, 431, 356 (2004).
15. El autor reconoce que la financiación provino de Gatsby.
Organizaciones benéficas, Biotecnología y Biología
Consejo de Investigación Científica y Educación Infantil, Escuelas
Fondo de Bienvenida y Tecnología
Impacto de la ayuda.
Materiales de soporte en línea
www .science mag org/CGI/content/full/1106910/DC 1
Materiales y métodos
Cuadros S1 y S2
Referencias y Bonos
29 de octubre de 2004 10 Aceptado, 65438 + 2005 10 25 de febrero
p>
Publicado en línea el 3 de febrero de 2005;
10.1126/Science.1106910
Para incluir esta información, consulte este documento.
Genes operadores de traducción
Para los ribosomas: cómo inhibir sustancias
Las proteínas impiden la unión de los ribosomas.
Russ Jenner, 1 Pascal Romby, 2 Bernard Reese, 1
Clemens Schultz-Brice, 3.er estudiante, Springer, 4 Chantal Ehresmann, 2.
Bernard Ehresmann, 2 Dino Moraes, 1 Gurnara Yusupova, 1.
Yusupov 1,2 *
Transferencia de ribosomas termófilos desde cocristales a patrocinadores.
El ARN (moléculas de ARNt) y el ARN mensajero (ARNm) estructuralmente intacto llevan la traducción.
Operador. El ARNm de carretera se define con una resolución de 5,5 Angstrom.
Más complejos que los ribosomas con la misma estructura cristalina.
Falta la expresión de ARNm no estructurado o se expresa al mismo tiempo. Entorno ribosómico preciso
El bucle del vástago del operador de poste es perpendicular a la superficie.
La subunidad de los años 30 del ribosoma en esta plataforma. Los operadores de unión y los ARNt iniciadores se producen en los ribosomas y un ARNt deshabitado se evacua del sitio.
Espere que al principio sea complicado. Supervisión de posicionamiento
El operador de este dominio aclara la posición de la molécula con respecto al ribosoma.
Mecanismo que limita el cambio del supresor a la sobretraducción. Nuestros datos
sugieren cómo expresar los elementos de control en general.
ribosomas para completar sus tareas reguladoras.
Cuando la traducción inicial gana aceptación universal, se requiere una rápida adaptación. La eficacia acordada favorece la síntesis de proteínas, varios elementos implicados en los ribosomas eubacterianos.
El paso clave es controlar la expresión de los genes, y los genes afectan la dinámica de la investigación.
1 de abril de 2005 Volumen 1 308 www.sciencemag.org Ciencia
Espero ser tu amigo