Principios básicos de la electroforesis capilar
La electroforesis capilar (CE), también llamada electroforesis capilar de alto rendimiento (HPCE), es uno de los métodos analíticos de mayor crecimiento en los últimos años. En 1981, Jorgenson y Lukács propusieron por primera vez el uso de alto voltaje para la separación en una columna capilar de 75 μm de diámetro interior, creando la electroforesis capilar moderna.
En 1984, Terabe et al. establecieron la cromatografía electrodinámica capilar micelar. En 1987, Hjerten estableció el enfoque isoeléctrico capilar y Cohen y Karger propusieron la electroforesis en gel capilar.
Los primeros instrumentos comerciales de electroforesis capilar aparecieron entre 1988 y 1989. En tan solo unos años, la CE ha ganado rápidamente popularidad porque cumple con los requisitos para la separación y análisis de péptidos, proteínas (incluidas enzimas, anticuerpos), nucleótidos e incluso ácido desoxirribonucleico (ADN) en diversos campos de las ciencias biológicas representadas por la bioingeniería. .
CE es el producto de una combinación de tecnología de electroforesis clásica y separación de microcolumnas moderna. En comparación con la cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC), la CE y la cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) son similares en el sentido de que ambas son tecnologías de separación de alta eficiencia, las operaciones de los instrumentos se pueden automatizar y ambas tienen una variedad de modos de separación diferentes.
La diferencia entre los dos es que CE utiliza el tiempo de migración para reemplazar el tiempo de retención en HPLC. El tiempo de análisis de CE generalmente no supera los 30 minutos, lo que puede ser más rápido que el de HPLC. deducido teóricamente La altura de la placa teórica es proporcional al coeficiente de difusión del soluto. Para macromoléculas biológicas con coeficientes de difusión pequeños, la eficiencia de la columna es mucho mayor que la de HPLC.
CE requiere muestras de nivel nl, que pueden ser tan bajas como 270fl, y la cantidad de fase móvil es de solo unos pocos mililitros, mientras que HPLC requiere muestras de nivel μl y las fases móviles requieren cientos de mililitros o aún más; pero la CE sólo puede lograr una micropreparación, mientras que la HPLC puede lograr una preparación de gran volumen.