Actualmente existen dos procedimientos experimentales inmunohistoquímicos de uso común: el método de tres pasos y el método de dos pasos. El primero ha sido el procedimiento estándar en inmunohistoquímica durante mucho tiempo y todavía se utiliza en la actualidad. Este último es un método relativamente sensible introducido en los últimos años (1995). Su funcionamiento es más conveniente que el método de tres pasos, pero el precio también es más alto que el primero. El principio es reemplazar el anticuerpo secundario y el anticuerpo terciario unido a una enzima en el método tradicional de tres pasos con el conjugado del anticuerpo secundario y la enzima en el método de dos pasos. Es decir: complejo antígeno~anticuerpo primario~anticuerpo secundario*enzima. Se caracteriza por su alta sensibilidad, fondo limpio, simplicidad y velocidad, puede ahorrar el paso de bloqueo del suero en el método de tres pasos y tiene un sistema de amplificación de señal más alto. En cuanto a los pasos detallados, depende del kit que utilices. A continuación se utiliza el kit de detección inmunohistoquímica de peroxidasa polimérica de rábano picante para ilustrar sus características y principios.