El siguiente es un ejemplo de un protocolo experimental diseñado para aislar y detectar microorganismos resistentes a los antibióticos del suelo:
Propósito experimental: detectar microorganismos con características resistentes a los antibióticos a partir de muestras de suelo.
Pasos experimentales:
Recolección y procesamiento de muestras:
a. Seleccionar muestras de suelo de diferentes fuentes, como tierras de cultivo, parques o pastizales, etc.
b. Recoger muestras de suelo utilizando herramientas esterilizadas y almacenarlas en recipientes secos y estériles.
c.Convierta cada muestra de suelo en una suspensión y obtenga una suspensión de suelo uniforme agregando un tampón adecuado (como solución salina fisiológica) y agitando para mezclar.
Dilución y aislamiento:
a. Realizar diluciones seriadas de la suspensión del suelo para obtener el número adecuado de unidades formadoras de colonias (UFC).
b.Utilizando el método de recuento en placa, esparza la suspensión de suelo diluida uniformemente en una placa de agar que contenga antibióticos adecuados y ricos en nutrientes.
c. Utilice hisopos de algodón esterilizados para dividir las muestras de suelo en diferentes placas para evitar la contaminación cruzada.
d. Incubar la placa en una incubadora a temperatura constante en condiciones apropiadas para promover el crecimiento microbiano.
Cribado de antibióticos:
a. Seleccionar placas de agar con diferentes tipos de antibióticos. Se pueden incluir antibióticos tanto de amplio espectro como de clase específica.
b.Transfiera una sola colonia de la placa en el paso anterior a una nueva placa de agar que contenga el antibiótico correspondiente.
c. Incubar estas placas en una incubadora a temperatura constante y observar si crecen las colonias.
Identificación de colonias:
a. Seleccionar colonias que muestren tolerancia y aislarlas en cultivos puros.
b.Realizar experimentos microbiológicos de rutina, como observación morfológica, tinción de Gram, pruebas fisiológicas y bioquímicas, etc., para determinar las características de la cepa.
c. Se pueden utilizar técnicas de biología molecular, como la secuenciación del gen 16S rRNA, para identificar y clasificar las cepas seleccionadas.
Análisis de resultados:
a. Registrar el número y tipos de cepas con resistencia a antibióticos.
b. Realizar estadísticas y análisis de datos para comprender la distribución y diversidad de microorganismos resistentes a los antibióticos.
Notas Experimentales:
Todas las operaciones experimentales deben realizarse en condiciones estériles para evitar la contaminación externa.
Preste atención al uso de equipos de protección personal, como guantes y máscaras de laboratorio, para garantizar un funcionamiento seguro.
Utilizar antibióticos de forma racional y eliminar adecuadamente los residuos experimentales de acuerdo con las normativas y directrices éticas pertinentes.