Medición de la actividad peroxidasa, el contenido relevante es el siguiente:
La peroxidasa (catalasa) es una enzima común cuya función principal es descomponer el peróxido de hidrógeno (agua oxigenada), que es un Sustancia oxidante tóxica que se encuentra comúnmente dentro de las células. La medición de la actividad peroxidasa es un método para evaluar el estrés oxidativo y la capacidad antioxidante en las células del organismo.
Los siguientes son métodos y pasos experimentales comunes para medir la actividad de la peroxidasa:
1. Materiales y reactivos experimentales:
Muestras de tejido vegetal o animal: tejido fresco. o se puede utilizar un homogeneizado de tejido centrifugado.
Solución de hidroperóxidos: Habitualmente se utilizan 3 hidroperóxidos como sustratos.
Solución de lavado: Habitualmente se utiliza solución salina normal o tampón fosfato.
Solución stop calasa: solución que se utiliza para detener la reacción de la peroxidasa, como por ejemplo ácido fórmico, etc.
Etanol: utilizado para extraer y conservar muestras de enzimas.
Tubo de ensayo o plato de reacción: Recipiente que se utiliza para las reacciones.
2. Pasos experimentales:
Preparación de la muestra: coloque la muestra de tejido vegetal o animal obtenida en un tubo de centrífuga, agregue una cantidad adecuada de líquido de lavado y use un agitador o disruptor ultrasónico. Mezclar. Triturar el tejido celular para obtener un homogeneizado de tejido.
Determinación de la actividad: Tomar una determinada cantidad de muestra homogeneizada y añadirla a la solución de hidroperóxido para iniciar la reacción. La peroxidasa descompone el hidroperóxido en agua y oxígeno. La tasa de generación de burbujas es directamente proporcional a la actividad de la peroxidasa.
Parada de actividad: Tras un tiempo determinado de reacción, añadir solución de parada de catalasa para detener la actividad de peroxidasa y detener la generación de burbujas.
Recogida de gases: Utilice un dispositivo de recogida de gases para recoger el oxígeno generado. Al recolectar la cantidad de oxígeno producida dentro de un cierto período de tiempo, la actividad de la peroxidasa puede reflejarse indirectamente.
Medición y cálculo: Medir el volumen o concentración de oxígeno utilizando métodos adecuados. En función de la cantidad de oxígeno recolectado, se calcula la actividad peroxidasa por unidad de tiempo.
3. Factores a considerar:
Procesamiento de muestras: La preparación y almacenamiento de muestras tienen un gran impacto en los resultados experimentales. Preste atención a los métodos de procesamiento de muestras y las condiciones de almacenamiento.
Condiciones de reacción: la temperatura de reacción, el pH y otras condiciones afectarán la actividad de la enzima. Se deben seleccionar las condiciones de reacción apropiadas para los experimentos.
Tiempo de reacción y concentración de sustrato: El tiempo de reacción y la concentración de sustrato también tienen un impacto en los resultados experimentales, y es necesario controlar estos parámetros.
Control de calidad: preste atención al control de calidad durante el experimento y repita el experimento para garantizar la confiabilidad de los resultados.
Medir la actividad de la peroxidasa es un método para evaluar la capacidad antioxidante de los organismos. Comprender los cambios en la actividad de la peroxidasa es útil para estudiar el proceso de estrés oxidativo en las células y es de gran importancia en medicina y biología. en campos como la ciencia.