Importancia: la matriz polimérica es principalmente poliestireno-divinilbenceno o polimetacrilato, que es químicamente estable, tiene un amplio rango de pH de aplicación, tiene una hidrofobicidad más fuerte y es eficaz para separar mejor proteínas y otras muestras; pero la resistencia es baja, los disolventes orgánicos pueden hacer que el polímero se hinche y se dañe, la repetibilidad del lote es pobre, no hay muchas columnas cromatográficas comerciales y el precio es generalmente más caro.
1. Parámetros de propiedades físicas de la columna de cromatografía líquida
1. Longitud de la columna, diámetro interior
Por ejemplo, 250*4,6 mm. Generalmente, la longitud de la columna es de 2 a 250 mm. Cuanto más larga es la columna, mayor es la resolución, pero la presión de la columna es mayor y la separación tarda más, pero la resolución es proporcional a la raíz cuadrada del número de platos teóricos, por lo que aumenta; la longitud de la columna no lo hará. No es el método de separación más eficaz. Generalmente, un empaque de 150 mm y 5 um puede proporcionar una cantidad suficiente de placas.
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2. Tamaño de partícula
El tamaño de partícula afecta la resolución cromatográfica. Cuanto menor sea el tamaño de las partículas, más rápida será la separación y mayor será la eficiencia de la columna. Sin embargo, cuanto mayor sea la presión de la columna, la columna se contaminará fácilmente, lo que reducirá su vida útil. Las columnas analíticas comunes suelen utilizar un relleno de 5 um, la separación de muestras complejas de múltiples componentes generalmente utiliza un tamaño de partícula de 3,5 um y las columnas de cromatografía preparativa de mayor diámetro interior suelen utilizar un tamaño de partícula más grande. Si la selección de la fase estacionaria es correcta pero la resolución no es suficiente, entonces puede ser útil seleccionar un empaque de tamaño de partícula más pequeño. La eficiencia de una columna de relleno de 3,5 um es casi un 30% mayor que la de una columna de relleno de 5 um en las mismas condiciones; sin embargo, la contrapresión de una columna de 3,5 um es el doble que la de una columna de 5 um, entonces, ¿cómo elegir el relleno? El tamaño de las partículas debe basarse en la situación real.
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3. Apertura
Apertura, 60A, 120A, 300A, etc. Si el tamaño de los poros es pequeño, la porosidad será alta, el área de superficie específica será grande y la capacidad de carga de carbono será alta. El tamaño de los poros del relleno de la columna cromatográfica debe coincidir con el tamaño de las moléculas para garantizar que las moléculas. puede entrar y salir libremente de los poros de empaque y separarse y distribuirse con la fase unida en la superficie interna de los poros. Generalmente se requiere que el diámetro de los poros sea más de 3 veces el diámetro de la molécula. para moléculas pequeñas y 300A para moléculas grandes.