1. Plásmido Ti
El plásmido Ti es un plásmido inductor de tumores, que es el material genético extranuclear de Agrobacterium tumefaciens. Es una molécula de ADN circular de doble cadena con una longitud de aproximadamente. 200 kb, el peso molecular es (90~150)*106u. El hongo infecta las plantas a través de heridas y forma agallas agrandadas en las plantas enfermas. Las células del tumor biliar pueden sintetizar opinión, que no se encuentra en las plantas normales. El plásmido Ti transporta genes relacionados con la síntesis de opinión. Según los diferentes tipos de opinión contenidos en los tumores vegetales inducidos, el plásmido Ti se puede dividir en cuatro categorías, a saber, tipo octopina, tipo nopalina, tipo agropina y tipo agrocinopina, etc. . Después de que Agrobacterium tumorigénico invade las plantas, la secuencia de la región de ADN T en su plásmido Ti puede transferirse e integrarse en el cromosoma de la planta.
2. Sistema de vector de transformación del plásmido Ti Aunque el plásmido Ti puede introducir genes extraños en las plantas y expresar sus productos, debido a que los plásmidos Ti de tipo salvaje tienen muchas deficiencias, los plásmidos Ti de tipo salvaje no se utilizan directamente en ingeniería genética. Plásmido Ti. Su región de ADN-T contiene genes que controlan la diferenciación del tallo y la raíz. Cuando estos genes se integran en el genoma de la planta junto con la región de ADN-T, destruirán el equilibrio hormonal en la planta, provocando un crecimiento y una diferenciación anormales, de modo que la planta. la planta no puede regenerarse. Para hacer del plásmido Ti un vector eficaz para introducir genes extraños, es necesario modificar el plásmido Ti de tipo salvaje y eliminar los genes oncogénicos para convertirlo en un vector "desarmado". La eliminación de grandes secciones de la región de ADN-T después de la escisión, o la inserción de genes extraños en la región de ADN-T no afectará las funciones de transferencia e integración de la región de ADN-T.
En la actualidad, se utilizan principalmente dos sistemas de vectores de transformación de genes de plásmido Ti, a saber, el sistema de vector integrado y el sistema de vector binario.
***La región de ADN-T en el plásmido Ti del vector de integración codifica la secuencia del gen oncogénico, que generalmente se reemplaza por el ADN del plásmido pBR322, pero conserva las secuencias repetitivas en ambos extremos. El vector intermedio derivado de pBR322 que porta el gen extraño se introduce desde Escherichia coli en la Agrobacterium tumorigénica. La misma secuencia de pBR322 de los dos sufre recombinación homóloga y el gen extraño se integra en el ADN-T del plásmido Ti desarmante. El vector intermedio usado no sólo contiene secuencias homólogas a la región de ADN-T del plásmido Ti, sino que también tiene uno o varios genes marcadores seleccionables bacterianos, marcadores seleccionables positivos para plantas y un único locus de endonucleasa de restricción, y no tiene ambos extremos de la secuencia del borde del plásmido Ti. Los sistemas vectoriales integrados de uso común incluyen el sistema pGV3850, el sistema pGV2260, el sistema pMON220, etc.