La preparación de muestras en portaobjetos es de gran importancia para comprender la estructura morfológica de los organismos. Las muestras en portaobjetos incluyen muestras en portaobjetos temporales (como frotis, prensados y montajes temporales) y muestras en portaobjetos permanentes (como montajes y secciones permanentes).
1. Método de frotis
El método de frotis es un método de producción en el que los materiales se distribuyen uniformemente sobre un portaobjetos de vidrio.
Los materiales de frotis incluyen organismos unicelulares, microalgas, sangre, líquido de cultivo bacteriano, tejidos animales y vegetales sueltos, testículos, anteras, etc.
Tener cuidado al aplicar: (1) El portaobjetos debe estar limpio. (2) La guía deslizante debe ser lisa. (3) El recubrimiento debe ser uniforme. Deje caer la solución de frotis en el medio del portaobjetos cargado hacia la derecha y extiéndala uniformemente con una hoja de bisturí o un palillo. (4) El recubrimiento debe ser fino. Utilice otro portaobjetos como empujador y empuje suavemente el líquido para untar de derecha a izquierda a lo largo de la superficie del portaobjetos (el ángulo entre los dos portaobjetos debe ser de 30° a 45°) y extiéndalo en una capa fina y uniforme. (5) Fijo. Si es necesario, se pueden utilizar fijadores químicos o métodos de secado (bacterias) para la fijación. (6) Teñido. El azul de metileno se usa para las bacterias y el tinte de Wright para la sangre. La solución de tinte debe cubrir todas las superficies pintadas. (7) Lavado. Remojar en papel absorbente o hornear. (8) Sellado. Conservación a largo plazo de las tabletas de chicle canadienses.
2. Método de prensado de tabletas
El método de tableta es un método en el que se colocan materiales biológicos entre un portaobjetos de vidrio y un cubreobjetos, y se aplica una cierta cantidad de presión. dispersar las células del tejido.
El proceso general del método de tableteado: (1) Recuperación de materiales. Para observar la división celular, se deben seleccionar como materiales células de tejido fresco con una división celular vigorosa. Como puntas de raíces, meristemas apicales de brotes, células de médula ósea y anteras (células madre del polen). Testículos (espermocitos), etc. (2) Fijo. La fijación del material se puede determinar según las necesidades. Inmediatamente después de tomar el material, se puede presionar en una tableta para su observación. No es necesario fijarlo por separado (sincronizado con el teñido si el material no se inspecciona inmediatamente); Al tomarlo, se puede fijar con un fijador (generalmente fijador de alcohol de ácido acético). Fijar durante 2 a 24 horas (dependiendo del material), luego limpiar con etanol al 95% y almacenar en etanol al 70% para su uso posterior. (3)Aislamiento. Los materiales con células difíciles de dispersar deben tratarse con una solución de separación por hidrólisis (como HCl 1 N o semen con ácido clorhídrico y alcohol) durante 6 a 20 minutos. Después de la disociación, se pueden teñir enjuagando con agua. (4) Teñido. Hay muchos tipos de tintes. Para la observación de cromosomas se utiliza habitualmente la tinción con acetato de fucsina. (5) Prensado de tabletas. Colocar el material en un portaobjetos, agregar una gota de agua o solución colorante, cubrir con un cubreobjetos y presionar suavemente con el pulgar. (6) Observación. Después del prensado, se puede observar al microscopio.
3. Método de carga
El método de carga es un método para sellar todo el material biológico para realizar una muestra en portaobjetos, que se puede utilizar para realizar una carga temporal o permanente.
Los materiales de embalaje incluyen: microorganismos como Chlamydomonas, Spirogyra, ameba, hidroide, epidermis de hojas de plantas, patas, piezas bucales de insectos, células epiteliales orales humanas, etc.
Las cosas a tener en cuenta son: (1) Al sostener los toboganes, asegúrese de mantenerlos planos o colocarlos en la plataforma. Al gotear agua, la cantidad de agua debe ser adecuada, lo suficiente para cubrir el cubreobjetos. (2) Utilice una aguja de disección o unas pinzas para desplegar el material sin superponerlo y aplanarlo en el mismo plano. (3) Al colocar el cubreobjetos, cúbralo lentamente sobre la gota de agua desde un lado para evitar la generación de burbujas. (4) Al teñir, coloque una gota de solución de tinción en un lado del cubreobjetos y aspírela por el otro lado con papel absorbente para colorear uniformemente la muestra debajo del cubreobjetos. Después de teñir, use el mismo método, agregue una gota de agua, succione la solución de tinte y obsérvela bajo un microscopio.
2. Técnicas experimentales básicas de los microscopios
1. Cómo utilizar lentes de bajo aumento (4X, 10X)
El funcionamiento del microscopio incluye principalmente dos aspectos: ( 1 ) ajuste de brillo. Orientar correctamente la luz es el primer requisito previo para una observación exitosa de los objetos. Al apuntar, primero levante el condensador, abra la apertura y gire el reflector. En este momento, mientras mira el campo de visión en el espejo, ajuste el tornillo del condensador hasta obtener una luz uniforme y brillante en el campo de visión. (2) Ajuste de la distancia focal. Al enfocar, primero corte la sección de observación y use la hélice para alinearla con el centro de la apertura. Luego concéntrate en dos pasos. Primero use el ajustador grueso para fijar la distancia focal, mire el ocular con el ojo izquierdo y deje que el ajustador grueso suba lentamente hasta que pueda ver la muestra con claridad. Luego ajuste el recortador y levante ligeramente el cilindro de la lente hasta que la imagen del objeto sea más clara.
2. Cómo utilizar una lente de alta potencia (40x)
(1) Mueva la parte de la imagen del objeto que se encuentra en la lente de baja potencia al centro del campo. de vista.
(2) Gire el convertidor del revólver para alinear la lente del objetivo de 40X con la apertura. Al girar, mire la lente del objetivo desde un lado para evitar que la lente presione la diapositiva. (3) Ajuste el tornillo de ajuste fino para que la imagen sea clara.
3. Cómo usar la lente de aceite (100X)
(l) Primero, use una lente de bajo aumento para encontrar la estructura fina que se observará para una lente de alto aumento. , mueva la estructura al centro del campo de visión. (2) Baje, ponga una gota de asfalto aromático en la muestra del portaobjetos y cambie el espejo de aceite. Mire la lente de aceite desde un lado, levante el soporte de la lente y deje que la lente de aceite se sumerja en las fragantes gotas de alquitrán. (3) Gire el tornillo de ajuste fino para aclarar la imagen y observar. (4) Después de la observación, limpie el alquitrán aromático de la lente oleosa y del portaobjetos con papel para lentes y luego limpie la lente con un poco de xileno o éter/etanol absoluto.
4. Método sencillo para instalar el puntero
Desatornille la tapa superior del ocular (una lente), corte una pequeña sección de cabello (la longitud es aproximadamente igual al radio). del ocular), y sujete un extremo con unas pinzas, sumerja el otro extremo en un poco de pegamento neutro y péguelo en la abertura metálica (un anillo de hierro) en la pared interior del ocular. Después de que se seque ligeramente, apriete la cubierta superior y úsela.
3. Método de recuento de células individuales
En cultivos bacterianos y cultivos celulares in vitro, así como en análisis de sangre para monitorización ambiental, a menudo es necesario contar bacterias, células, células individuales. -Se contaron algas celulares, protozoos, glóbulos y polen. El principio del método de recuento de células es contar directamente el número de células en un determinado volumen de líquido bajo un microscopio y utilizar los resultados para calcular el número de células individuales por mililitro de agua. El método específico es el siguiente:
1. Método de conteo de gotas de agua
Utilice una boquilla redonda y lisa de tamaño adecuado para aspirar 1 ml de agua y luego determine cuántas gotas de agua. la pajita puede caer (repetidamente hasta que sea precisa). Esto le permite calcular el volumen de cada gota de agua que cae de la pajita. Al tomar muestras con una pipeta, si una sola célula está activa, mátela con yodo antes de contarla; si la concentración de la muestra es demasiado alta para contarla, dilúyala a una concentración adecuada con múltiplos; además, la muestra debe agitarse antes de tomar la muestra; y la muestra debe tomarse inmediatamente después de agitar. Después de tomar muestras y contar bajo un microscopio, el número promedio de células en una gota de agua se puede calcular según la siguiente fórmula.
El número de células en 1 ml de agua = recuento medio × número de gotas por mililitro de pipeta cuantitativa × factor de dilución.
2. Método de conteo del tablero de conteo de células sanguíneas
El tablero de conteo de células sanguíneas es un portaobjetos de vidrio grueso especial con dos cámaras de conteo en el centro. Cada sala de recuento se divide en 9 cuadrados grandes (consulte la imagen a continuación). Cada cuadrado grande tiene un área de 1 mm2 y una profundidad de 0,1 mm después de agregar un cubreobjetos. Entonces el volumen de cada cuadrado grande es de 0,1 mm. Además, el cuadrado central se divide en 25 cuadrados intermedios mediante líneas dobles. Cada cuadrado del medio se dividió en 16 cuadrados más pequeños para el recuento de células.