Objetivo y requisitos
1. Comprender los requisitos y métodos de recogida de muestras de suelo.
2. Dominar los principios básicos y técnicas de funcionamiento para aislar actinomicetos raros del suelo.
3. Aprender y dominar el método de dilución del suelo y la tecnología de cultivo puro de microorganismos.
4. Conocer y dominar los métodos de identificación de antibióticos.
2. Principio
La detección de actinomicetos es uno de los temas importantes en la investigación de nuevos antibióticos. Hasta el momento, el 80% de los antibióticos descubiertos hasta el momento provienen de actinomicetos. Los actinomicetos existen principalmente en el suelo y ocupan una proporción considerable en el suelo. Generalmente, los actinomicetos abundan en suelos secos, alcalinos y ricos en materia orgánica. Generalmente, los tipos, cantidades y propiedades antagónicas de los actinomicetos varían según la distribución geográfica, la vegetación y las propiedades del suelo. El suelo es la base de los microorganismos y la mayoría de los actinomicetos que contiene son Streptomyces. Por lo tanto, la gente suele referirse a otros actinomicetos, excepto a los Streptomyces, como actinomicetos raros. Si se separan por métodos convencionales, casi todas las bacterias obtenidas serán Streptomyces. Sin embargo, cuando se utilizan métodos como calentar muestras de suelo, seleccionar medios de cultivo especiales o agregar ciertos antibióticos, se puede aumentar la tasa de adquisición de actinomicetos raros. Existen muchos métodos para aislar actinomicetos del suelo, incluido el método de dilución, el método de bombardeo del suelo, el método de mezcla del suelo y el método de pulverización del suelo. Este experimento utiliza principalmente el método de dilución y selecciona un medio de cultivo especial para obtener una pequeña cantidad de nematodos radiactivos raros. .
Es necesario identificar mejor los actinomicetos aislados del suelo como antibióticos necesarios. En primer lugar, se debe determinar el modelo de prueba de acuerdo con el propósito de la detección y luego se debe realizar la prueba de antagonismo utilizando placas de cultivo. Los métodos más utilizados incluyen el método del bloque de agar y el método del papel de filtro. Se basa principalmente en el principio de difusión, es decir, observar si aparecerá una zona de inhibición obvia alrededor de los antibióticos. El tamaño y la transparencia de la zona de inhibición indican la fuerza de la actividad antibacteriana de la cepa bacteriana. Estos dos métodos fueron elegidos para este experimento.
3. Materiales experimentales
1. Medio de cultivo: Agar glucosa-asparagina, agar arginina, agar Gower's No. 1, cada uno de los medios de cultivo anteriores utiliza un matraz Erlenmeyer de 500 ml. Dispense 250 ml.
2. Artículos de esterilización: bolsas de papel kraft, placas de Petri, pajitas de 1 ml, 5 ml, matraces triangulares de 250 ml llenos con 90 ml de agua esterilizada (que contienen 30 perlas de vidrio), tubos de ensayo de 18 × 180 mm llenos de 9 ml de agua esterilizada. , un palillo, una espátula de vidrio y 10 ml de solución madre de 1‰K2Cr2O7 en un tubo de ensayo de 18×180 mm.
3. Bacterias de prueba:
(1) Bacillus subtilis (Bacillus subtilis)
(2) Escherichia coli
(3) Staphlococcus aureus
(4) Ruodotorula rubra
4 Otros: pala para tierra, tamiz de malla fina, cuchara medicinal, papel para pesar, soporte para tubos de ensayo, balanza pequeña, marcador, perforadora, calibre a vernier, pinzas, papel de filtro redondo, tubo de ensayo de 15 × 150 mm lleno con 5 ml de agua esterilizada, pajita de 1 ml, embudo estéril.