1.
2. Electroforesis: Las proteínas se cargan en soluciones por encima o por debajo de su punto isoeléctrico, y pueden moverse hacia el polo positivo o negativo del campo eléctrico en un campo eléctrico. Dependiendo del soporte, existen electroforesis en película fina, electroforesis en gel, etc.
3. Diálisis: Método de separación de proteínas moleculares grandes de compuestos moleculares pequeños mediante una bolsa de diálisis.
4. Cromatografía:
a. La cromatografía de intercambio iónico utiliza la naturaleza libre de anfóteros de las proteínas. A un determinado valor de pH, cada proteína tiene diferentes cargas y propiedades. mediante cromatografía de intercambio iónico. Por ejemplo, en la cromatografía de intercambio aniónico, primero se eluyen las proteínas con pequeñas cargas negativas.
b. Tamiz molecular, también conocido como filtración en gel. Las moléculas pequeñas, como las proteínas, entran en el agujero y permanecen durante mucho tiempo, mientras que las moléculas grandes, como las proteínas, no pueden entrar en el agujero a tiempo y salir directamente.
5. Ultracentrifugación: se puede utilizar para separar y purificar proteínas y determinar el peso molecular de las proteínas. Las diferentes proteínas se distinguen por sus diferentes densidades y formas.
Notas sobre la purificación de proteínas:
1. Para evitar la desnaturalización de las proteínas, no agite la muestra vigorosamente y congele y descongele repetidamente.
2. La composición de la solución tampón simula al máximo el anillo interior de la célula.
3. Para evitar la oxidación de proteínas, agregue 0,1 ~ 1 mmol/LDTT (ditiotreitol) (o β-mercaptoetanol) a la solución tampón.
4. Para evitar daños a la proteína objetivo por metales pesados, se añade 1 ~ 10 mmol/ledta de agente quelante de metales.
5. Para evitar el crecimiento de microorganismos, utilice solución esterilizante. A la hora de depurar cualquier proteína, presta siempre atención a su estabilidad y protege su actividad. Necesitamos recordar las siguientes precauciones generales.
6. Intente operar en hielo o en una cámara frigorífica.
7. La concentración de proteínas no debe ser demasiado diluida.
8. A menos que sea una capa de enfoque. De lo contrario, el valor de pH debe ser apropiado para evitar que el valor de pH de la solución tampón sea el mismo que el valor de pH del pI para evitar la precipitación de proteínas.
9. Utilice inhibidores de proteasa para evitar la degradación de las proteínas objetivo por parte de las proteasas. Al purificar las proteínas intracelulares, agregue DNasa para degradar el ADN y evitar la contaminación de las proteínas por el ADN.