(1) Las células que se van a criopreservar deben estar en un estado de buen crecimiento (fase logarítmica) y una alta tasa de supervivencia, alrededor del 80-90% de densidad. Antes de la criopreservación, se debe garantizar que las células tengan buena viabilidad y no estén contaminadas.
(2) Pruebe si las células aún conservan sus propiedades únicas antes de congelarlas. Por ejemplo, se debe probar el hibridoma para determinar la producción de anticuerpos. a dos días antes de la criopreservación.
(3) 3. Asegúrese de que la concentración de DMSO sea 10 y esté dispuesto a utilizar DMSO importado para células congeladas.
(4) Preste atención a la calidad de el crioprotector. El DMSO debe ser grado reactivo, estéril e incoloro (filtrado con FGLP Telflon de 0,22 micrones o comprar productos estériles directamente, como Sigma D-2650), envasado en pequeños volúmenes de 5 a 10 ml, almacenado a 4°C en la oscuridad, no No descongelar varias veces. El glicerol también debe ser de grado reactivo, esterilizarse con vapor a alta presión y almacenarse en la oscuridad. Úselo dentro del año posterior a la apertura, ya que será tóxico para las células después de un almacenamiento prolongado.
(5) Congelar lentamente y descongelar rápidamente. Las células formarán cristales intracelulares a alrededor de -15 grados Celsius, lo que dañará las células. El enfriamiento lento ayudará a reducir el daño. Por lo tanto, es más conveniente congelar las células en un refrigerador a -20 grados para lograr un enfriamiento lento. durante demasiado tiempo afectará la viabilidad celular.