Zhu Weifeng, Luo Daya, Li Xia, Xie Keminwan y otros.
Objetivo para establecer un método rápido de extracción de hisopos orales mediante salting out
Método de extracción de ADN genómico vegetal. Métodos Se utilizaron lisado celular y proteinasa K para digerir las células epiteliales orales, y luego se utilizaron 5 mol/l.
Utiliza NaCl para precipitar proteínas e isopropanol para precipitar ADN. Finalmente, el ADN obtenido se lavó con etanol 70 y se disolvió en Te (Tris-HCl 10 mmol/l, 1 mmol/l).
Ácido etilendiaminotetraacético, pH
8,0). Se utilizó la tecnología de reacción en cadena de la polimerasa-polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción (PCR-RFLP) para detectar los genes rs1042522 y CHRNA3 del gen TP53. .
Se utilizó el locus Rs12910984 para escribir. Verificación de secuenciación de muestras con diferentes genotipos. Resultados: La cantidad de ADN extraído de un solo hisopo oral osciló entre 0,68 y 2,56 μg, y la relación D260/D280 fue de 0,65.
El ratio se sitúa entre 1,77 y 1,94. Después de la amplificación por PCR y la digestión, se tipificaron claramente dos polimorfismos de un solo nucleótido en 10 muestras. Los resultados de la digestión con enzimas de restricción fueron consistentes con los resultados de la secuenciación. Conclusión Los resultados de este experimento son los siguientes
El método de sal puede obtener de forma rápida, fácil y económica ADN genómico de alta calidad a partir de hisopos orales.
Autor:
Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, Facultad de Medicina, Universidad de Nanchang;