Los pasos para realizar cortes en parafina son los siguientes:
1.
(1) Deshidratación con etanol: El tejido se deshidrata paso a paso mediante soluciones de etanol de diferentes concentraciones: 70%, 80%, 90%, 95%, 100%, 100%, etanol en cada nivel para 40 minutos (nota: los tejidos óseos y calcificados deben remojarse en la solución de descalcificación JYBL-Ⅱ durante 24 horas y luego se realiza el paso de deshidratación con etanol después de que el tejido se ablande);
(2) Transparencia : El tejido se empapa en tres xileno en secuencia, cada 1 hora en cada cilindro
(3) Inmersión en cera: el tejido se empapa en tres cilindros de parafina en secuencia, 1 hora en cada cilindro; p>
(4) Incrustación: Vierta la parafina líquida. Coloque el bloque de tejido empapado en cera en la caja del molde y luego coloque el bloque de tejido empapado en cera en la parte inferior, prestando atención a la dirección de la superficie de corte hacia abajo. la parafina se solidifica, retire el marco de inclusión y luego recorte el bloque de cera después de que se haya enfriado y endurecido por completo. Mantenga una cantidad adecuada de parafina en la periferia del corte para mayor comodidad.
2. Elaboración de cortes: Fijar el bloque de cera preenfriado en el microtomo de parafina de manera que la sección del bloque de cera quede paralela al filo del cuchillo. La inclinación del cuchillo suele ser de 15°C. el empujador giratorio para ajustar el espesor de la rebanada de 4 μm y cortar en rodajas con espesor uniforme.
Sostenga el cepillo con la mano izquierda y gire el mango del microtomo con la mano derecha. Después de sacar las rodajas, sosténgalas suavemente con el cepillo y luego use unas pinzas para pinzar suavemente las rodajas de cera. y colóquelos en la caja de exhibición con el frente y la temperatura del agua alrededor de 45 ℃. Una vez que la extensión esté plana, retire las rodajas. Para colocar la rebanada, sostenga un extremo del portaobjetos con la mano izquierda, ingrese al agua verticalmente para unir la rebanada, use unas pinzas con la mano derecha para empujarla y fíjela a dos tercios del recorrido del portaobjetos de vidrio.
Después de unir las lonchas, colócalas al aire para que se sequen ligeramente, hornéalas en una máquina de hornear a 65°C durante 1 hora y luego hornéalas en el horno durante 2 horas.
3. Desparafinar los cortes de parafina con agua
Poner los cortes de parafina en xileno I 10min - xileno II 10min - xileno III 10min - etanol absoluto I 5min - etanol absoluto II 5min - 90 alcohol 5min-80 alcohol 5min-70 alcohol 5min-50 alcohol 5min desparafinado en gradiente.
4. Tinción HE
Teñir los cortes de parafina con hematoxilina durante 0,5-1 minuto, enjuagar con agua del grifo, diferenciar con alcohol de ácido clorhídrico 1 durante unos segundos, enjuagar con agua del grifo, luego vuelva al azul con 1 solución acuosa de amoníaco durante 1 minuto y enjuague con agua durante unos segundos, colóquelo en una solución de tinte de eosina durante unos segundos y enjuague con agua corriente.
5. Deshidratación y sellado
Poner las secciones de parafina en etanol 75 durante 2 minutos - etanol 85 durante 2 minutos - etanol absoluto durante 5 minutos - etanol absoluto durante 5 minutos - xileno durante 5 minutos para que las secciones sean transparentes. Sacar el xileno y sellar con goma neutra.
6. Interpretación de los resultados
El núcleo es azul y el citoplasma es rojo.