Los explantes son los tallos tiernos de nuevas ramas extraídas de las raíces viejas de los crisantemos, o los tallos tiernos de plantas que se cortaron para convertirlas en plantas vivas ese año. Retire las hojas de los tallos jóvenes junto con los pecíolos.
①Esterilización de explantes. Enjuague los tallos tiernos en agua limpia varias veces, luego enjuague con detergente y entre en la sala de inoculación; remoje en Tween al 0,1% durante 2 a 3 minutos, principalmente para eliminar la pelusa de la superficie de los tallos tiernos y luego remoje en alcohol al 70%; durante 30 segundos, desinfectar con solución de lejía al 10% durante 8 a 10 minutos, y finalmente enjuagar con agua esterilizada de 6 a 7 veces para utilizar como material de inoculación.
②Vacunación. Cortar el material de inoculación en trozos pequeños con una longitud de 0,5 a 1 cm e inocularlo en el medio de cultivo preparado dentro del rango de control de llama de la mesa ultralimpia.
(2) Medio de cultivo.
El medio de cultivo de crisantemo es MS más 6-Ba2 mg/L, NAA 0,2 mg/L (o KT2 mg/L más NAA 0,2 mg/L) y la concentración de iones de hidrógeno del medio de cultivo es 316,3 ~ 1000. mmol/L (pH 6 ~ 6,5). Esterilizar durante 20 minutos en condiciones de esterilización convencionales.
(3) Condiciones de cultivo.
El cultivo a temperatura ambiente de 25 1 ℃ y la irradiación con lámparas fluorescentes durante 8 horas producirán callos y plántulas verdes en aproximadamente 2 semanas. Después de aproximadamente 1 mes de transferencia, las plántulas verdes continuarán creciendo y alargándose. , y luego ser transferido y multiplicado.
(4) Cultura de arraigo.
El medio de enraizamiento es MS+NAA 1～2 mg/L. Transfiera los segmentos de tallo de las plántulas verdes al medio de enraizamiento y las raíces se formarán en aproximadamente 10 días.
(5) Trasplante de plántulas en probeta.
Transplante las plántulas de tubo de ensayo enraizadas a tiempo (cuando la longitud de la raíz sea de 1 cm). Saque las plántulas del tubo de ensayo del tubo de ensayo, lave el medio de cultivo adherido a las plántulas y transplántelas a vermiculita (o perlita, partículas finas de turba, etc.). ) medio de cultivo, irrigar con agua limpia y después de aproximadamente 10 días para producir nuevas raíces, se pueden trasladar al suelo de cultivo para el cultivo convencional.