p1: La glucosa evita que la E. coli suspendida se deposite rápidamente en el fondo del tubo; el EDTA es un agente quelante de iones metálicos divalentes como Ca y Mg?, y su objetivo principal es quelar. Los iones metálicos divalentes se utilizan para inhibir la actividad de la ADNasa; se pueden agregar ARNasa A para digerir el ARN.
p2: Este paso es el tratamiento alcalino. Entre ellos, el NaOH se utiliza principalmente para disolver células y liberar ADN, porque en el caso de una alcalinidad fuerte, la membrana celular cambia de una estructura de membrana de doble capa a una estructura de microcápsula. El propósito de combinar SDS con NaOH es mejorar la fuerte alcalinidad del NaOH y, al mismo tiempo, el SDS actúa como un tensioactivo aniónico para destruir la membrana bicapa lipídica.
p3: La Solución III se utiliza para precipitar proteínas y neutralizarlas. Entre ellos, el acetato de potasio se usa para reemplazar los iones de sodio en SDS con iones de potasio para formar PDS, porque el lauril sulfato de sodio se convierte en lauril sulfato de potasio cuando se encuentra con iones de potasio, y el PDS es insoluble en agua y, al mismo tiempo, las moléculas de SDS se combinan. un promedio de dos aminoácidos, y la gran cantidad de precipitación producida por el reemplazo de iones potasio y sodio precipitará naturalmente la mayoría de las proteínas.
Se utiliza ácido acético 2 M para neutralizar el NaOH. Una vez que se rompe el ADN genómico, siempre que el fragmento tenga un tamaño de 50 a 100 kb, el PDS no lo precipitará. Por lo tanto, el tiempo de tratamiento con álcali debe ser corto y no se debe agitar vigorosamente, de lo contrario siempre habrá. Se encuentran rastros en el plásmido final. Se mezcla una gran cantidad de ADN genómico y se puede observar una banda gruesa de ADN total mediante electroforesis en agarosa.
El alcohol 75 se usa principalmente para limpiar la sal e inhibir la Dnasa; al mismo tiempo, la fuerte acidez de la solución III también se usa para hacer que el ADN se una mejor a la membrana de la fibra de silicato.
Información ampliada
Los plásmidos tienen la capacidad de replicarse de forma autónoma, lo que les permite mantener un número de copias constante en las células de la progenie y expresar la información genética que portan. Los plásmidos bacterianos son vectores comúnmente utilizados en la tecnología de ADN recombinante. El vector es una herramienta que introduce un gen extraño útil en las células receptoras para su proliferación y expresión mediante medios de ingeniería genética.
Recombinar un determinado fragmento de un gen diana en un plásmido para formar un gen recombinante o recombinante. Luego, este recombinante se transfiere a las células receptoras (como Escherichia coli) mediante tecnología de transformación microbiológica, de modo que los genes diana del recombinante puedan reproducirse o expresarse en la bacteria receptora, cambiando así las características originales de las células huésped o produciendo nuevas. sustancias.
Enciclopedia Baidu-Plásmido
Enciclopedia Baidu-Extracción de plásmido