1. Principio:
La hibridación por transferencia Southern es un método universal para localizar secuencias específicas de ADN genómico. El principio básico es que, bajo ciertas condiciones, dos cadenas simples de ácidos nucleicos con cierta homología pueden hibridarse específicamente para formar cadenas dobles según el principio de complementariedad de bases.
La electroforesis en gel de agarosa se utiliza generalmente para separar fragmentos de ADN digeridos por endonucleasas de restricción, desnaturalizar el ADN en el gel y transferir los fragmentos de ADN monocatenario in situ a una membrana de nailon u otro soporte en fase sólida. objeto, se fija mediante horneado en seco o irradiación ultravioleta, y luego se hibrida con una sonda marcada de la estructura correspondiente y luego se revela mediante autorradiografía o reacción enzimática para detectar el contenido de moléculas de ADN específicas.
2. Aplicación:
(1) Diagnóstico de enfermedades genéticas
(2) Análisis del perfil de ADN; Detección de ADN y su contenido en la muestra: Primero, la muestra de ADN (que contiene fragmentos de ADN de diferentes tamaños) se separa según la longitud de los fragmentos y luego se hibrida. Esto determina el tamaño de la molécula diana de hibridación.
(4) Análisis del producto PCR.
Información ampliada
El proceso de la tecnología de hibridación Southern blot:
La tecnología de hibridación Southern blot incluye dos procesos principales:
Uno es Las moléculas de ácido nucleico a medir se transfieren y unen a un determinado soporte sólido (membrana de nitrocelulosa o membrana de nailon) mediante un determinado método, es decir, transferencia;
El segundo es el ácido nucleico fijado a la membrana. El recocido con sondas marcadas con isótopos a una determinada temperatura y fuerza iónica es el proceso de hibridación molecular. Esta tecnología fue iniciada por E.M. Southern de la Universidad de Edimburgo en el Reino Unido en 1975, y la hibridación por transferencia Southern lleva su nombre.
En los primeros días de la transferencia Southern, el ADN del gel se desnaturalizaba y luego se transfería a una membrana de nitrocelulosa mediante sifón capilar. Los métodos de impresión incluyen electroporación y transferencia al vacío; las membranas de filtro incluyen membranas de nailon, membranas activadas químicamente (como membranas de celulosa APT, ABM), etc.
La transferencia Southern se puede utilizar para la digestión enzimática de genes clonados, análisis de mapas, análisis cualitativo y cuantitativo de un determinado gen en el genoma, análisis de mutaciones genéticas y análisis de polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción (RFLP), etc.
Enciclopedia Baidu-Tecnología de hibridación Southern Blot