La construcción de plásmidos permite a la empresa sintetizar un gen y los resultados de su propia amplificación y ligación por PCR son diferentes.
Para secuenciar secuencias desconocidas se puede amplificar el gen completo mediante PCR. Sin embargo, debido a las limitaciones técnicas de la secuenciación actual, no se pueden medir las secuencias en ambos extremos del fragmento de ADN. Secuenciación del producto Sólo se puede obtener la parte media de la secuencia del gen.
Así que use el vector T bacteriano para realizar la clonación TA, integre el gen en el plásmido y amplifíquelo, y luego use los cebadores del plásmido para realizar la PCR de modo que todo el gen objetivo se convierta en la parte media de la nueva ronda de productos de PCR De esta manera, la resecuenciación puede obtener la secuencia completa de la diana completa.
Además, la amplificación por PCR tiene una media de dos errores por cada 1.000 bases, y su fidelidad es muy inferior a la de la replicación in vivo.