Método de preparación de muestras para microscopía electrónica de transmisión
Debido a la limitación de la capacidad de penetración del haz de electrones del microscopio electrónico, la muestra debe cortarse en rodajas finas con un espesor inferior a 0,1 um. Este tipo de rebanada fina se llama rebanadas súper delgadas. El espesor de la sección ultrafina comúnmente utilizado es de 50 a 70 nm.
Entre los métodos de preparación de muestras para microscopía electrónica de transmisión, la tecnología de corte ultrafino es la tecnología de preparación más básica y comúnmente utilizada. El proceso de producción de secciones ultrafinas es básicamente similar al de las secciones de parafina, que requiere pasos como extracción del material, fijación, deshidratación, remojo, polimerización por inclusión, corte y tinción.
1. Requisitos básicos para la extracción del material
Una vez eliminado el tejido del organismo vivo, si no se procesa adecuadamente de forma inmediata, se producirá la autólisis celular debido a la acción de diversas enzimas. dentro de las células. Además, es posible que debido a la contaminación, los microorganismos se multipliquen dentro del tejido y dañen la estructura fina de las células. Por tanto, para mantener la estructura celular lo más viva posible, debe ser rápida, pequeña, precisa y fría:
(1). Muévase rápidamente. Una vez extraído el tejido del cuerpo vivo, debe colocarse en fijador de glutaraldehído 2,5 en el menor tiempo posible (intente hacerlo en 1 minuto).
(2). El volumen del tejido extraído debe ser pequeño, generalmente no más de 1 mm × 1 mm × 1 mm. El tejido también se puede recortar en una tira larga de 1 mm × 1 mm × 2 mm. Debido a que la capacidad de penetración del fijador es débil, si el bloque de tejido es demasiado grande, el interior del bloque no quedará bien fijado.
(3). El daño mecánico debe ser pequeño, los instrumentos de disección deben ser afilados y la operación debe ser suave para evitar tirones, contusiones y apretones.
(4). La operación se realiza mejor a baja temperatura (0°C a 4°C) para reducir la actividad enzimática y prevenir la autólisis celular.
(5). La ubicación del material debe ser precisa.
Cómo extraer el tejido: coloque el tejido extraído en una placa de cera limpia, deje caer una gota de fijador preenfriado y utilice dos cuchillas nuevas y afiladas para cortar y recortar el tejido en forma de "ver". "Sierra". pequeña y luego use palillos de dientes o fórceps para mover el bloque de tejido a un vial que contiene fijador frío. Si el tejido contiene mucha sangre y líquido tisular, se debe lavar varias veces con fijador antes de cortarlo en trozos pequeños y fijarlo.