1. La calidad de las células competentes. Por ejemplo, la eficiencia de transformación de las células supercompetentes es mucho mayor que la de las células competentes ordinarias.
2 Porque. debido a la baja concentración de plásmido y la pureza del producto de ligación, la baja eficiencia de transformación es mucho menor que la del plásmido puro;
3. etc.;
4. Condiciones para el cultivo de activación, el medio SOC es óptimo en el medio LB;
5. El medio utilizado para el recubrimiento y la concentración de antibióticos, etc.
Información ampliada:
Método de producción
Método CaCl?
1. Colocar E. coli de rápido crecimiento a baja temperatura (0 ℃). ) La solución hipotónica de cloruro de calcio pretratada hará que las células se hinchen. Al mismo tiempo, los iones de Ca harán que la bicapa de fosfolípidos de la membrana celular forme una estructura de cristal líquido, lo que provocará la disociación de algunas nucleasas en el espacio entre la membrana externa y la membrana interna. de la célula abandona el área e induce a las células a convertirse en células competentes
La permeabilidad de la membrana celular cambia y es fácil adherirse al ADN extraño y formar un complejo de hidroxi-fosfato cálcico en la célula. superficie resistente a la desoxirribonucleasa.
Al tratar las bacterias con otros iones metálicos divalentes (como Mn, Co), DMSO o agentes reductores, la tasa de conversión se puede aumentar entre 100 y 1000 veces.
2. En este momento, transfiera el sistema a 42 °C para una breve estimulación térmica (90 s). La estructura del cristal líquido de la membrana celular se alterará violentamente y aparecerán muchos espacios de ADN extraño. puede ser absorción celular. Las moléculas de ADN exógeno que ingresan a las células realizan la transferencia de información genética mediante replicación y expresión, lo que hace que las células receptoras desarrollen nuevos rasgos genéticos.
3. Cultivar las células transformadas en un medio selectivo y descartar clones positivos con moléculas de ADN exógenas.
Método de electroporación
El método de electroporación no requiere inducir previamente el estado competente de la bacteria. Se basa en una breve descarga eléctrica para promover que el ADN ingrese a la bacteria. La tasa puede alcanzar 109 ~ 1010 transformantes/ug de bucle cerrado. Debido a su simple operación, es cada vez más aceptado por la gente.
Importancia
Transferir el vector construido a células competentes para su expresión no sólo puede probar si el vector recombinante se construyó exitosamente, sino también la mayoría de las personas. Es más, las células competentes pueden servir como huéspedes para vectores recombinantes y pueden usarse para experimentos posteriores, como la expresión y purificación de proteínas.
Células competentes en la enciclopedia Baidu