Diferencias:
1. El líquido bacteriano requerido es diferente. El extracto grande se utiliza para extraer una gran cantidad de líquido bacteriano, que oscila entre 100 ml y 500 ml, mientras que el extracto pequeño utiliza una pequeña cantidad de líquido bacteriano, normalmente de 1,5 a 5 ml.
2. La pureza es diferente. El kit general contiene más lisozima, alcohol isopropílico (para recuperar ácidos nucleicos precipitados), cloruro que contiene una cierta cantidad de PEG (para recuperar ADN plasmídico), acetato de amonio, etc. que los kits pequeños. Sus funciones y propósitos son beneficiosos para la lisis de las bacterias. y purificación de plásmidos, por lo que el producto de la extracción grande es mucho mayor que el de la extracción pequeña, y la pureza es muy alta.
3. Los requisitos experimentales son diferentes. La minipreparación se usa generalmente para la identificación de plásmidos y experimentos que no requieren alta pureza, mientras que la preparación grande se usa para experimentos que requieren alta pureza, como la extracción de plásmidos a gran escala y la transfección.
Información ampliada:
Los principios básicos de los plásmidos grandes y pequeños son los mismos. Ambos se amplifican en bacterias mediante ciertos métodos (como la lisis alcalina). y luego el ADN se purifica mediante una serie de pasos como la eliminación de proteínas y la eliminación de ARN, y finalmente se extrae el ADN.
Cuatro requisitos para elegir plásmidos (los más utilizados) como vectores:
1) Elegir plásmidos de pequeño peso molecular, es decir, vectores pequeños (1-1,5 kb) → no fácil de dañar, en bacterias También hay muchos números de copias (también hay vectores grandes);
2) Generalmente, los plásmidos relajados se usan para amplificar en bacterias sin restricción, generalmente más de 10 copias, mientras que las estrictas plásmidos <10.
3) Debe haber más de un sitio de corte de enzimas, con espacio para la selección.
4) Debe haber marcadores fáciles de detectar, en su mayoría genes de resistencia a antibióticos, no específicos; Se refiere a múltiples Ampr (pruébelo).
No importa qué vector elija, primero debe obtener la molécula del vector y luego usar las enzimas de restricción apropiadas para cortar el ADN del vector para obtener moléculas que puedan conectarse fácilmente al fragmento del gen objetivo.
Enciclopedia Baidu_Extracción de plásmidos