Incluyen principalmente el diagnóstico de patógenos, el diagnóstico serológico, el diagnóstico por amplificación de ADN y el diagnóstico por imágenes. (1) Método de frotis de solución salina normal: para la amebiasis intestinal, el examen fecal sigue siendo el método más eficaz. Este método se utiliza para detectar trofozoítos activos. Generalmente, los trofozoitos son más comunes en las heces blandas o con pus y sangre, acompañados de glóbulos rojos y una pequeña cantidad de glóbulos blancos que se adhieren en racimos. Sin embargo, los insectos morirán rápidamente después de estar expuestos a la orina, el agua, etc., por lo que se debe prestar atención a la detección rápida y al mantenimiento de una temperatura superior a 25 ~ 30 ℃ y a prevenir la orina y otras contaminaciones. También hay que tener en cuenta que la aplicación de determinados antibióticos, laxantes o astringentes, enemas, etc. puede afectar a la supervivencia y actividad de los parásitos, pudiendo afectar a la tasa de detección.
El examen de frotis también se puede realizar en el líquido de punción del absceso, pero debe tenerse en cuenta que los parásitos se encuentran principalmente en la pared del absceso, por lo que se debe tener cuidado durante la punción y el examen. Además, los trofozoitos deben distinguirse de las células del tejido huésped bajo el microscopio, principalmente de la siguiente manera: los trofozoitos de Entamoeba histolytica son más grandes que las células del huésped. La proporción entre núcleo y citoplasma es menor que la de las células del huésped; Es un núcleo vesicular con nucléolo central y cromatina perinuclear clara; el citoplasma de trofozoitos puede contener glóbulos rojos y fragmentos de tejido.
(2) Método de frotis de yodo: para pacientes con diarrea crónica, el objetivo principal es examinar los quistes. La tinción con yodo se puede utilizar para visualizar los núcleos de los quistes y realizar un diagnóstico diferencial al mismo tiempo. La precipitación de quistes con el método de éter de formaldehído puede aumentar la tasa de detección entre un 40 % y un 50 %.
Además, en el caso de algunos pacientes crónicos, el examen de heces debe durar de 1 a 3 semanas para garantizar que no se pase por alto a ningún paciente.
(3) Cultivo in vitro: el método de cultivo es más sensible que el método de frotis que se usa comúnmente y la tasa de detección de casos subagudos o crónicos es relativamente alta, pero no se puede realizar. por laboratorios ordinarios, por lo que es un método poco convencional, pero muy interesante para la investigación.
En el examen de heces hay que distinguir Entamoeba histolytica de otros protozoos intestinales, especialmente Entamoeba coli y Entamoeba hartmani. Mientras que Entamoeba harmannii es fácil de diferenciar debido a su pequeño tamaño, Entamoeba coli a veces es más difícil de distinguir y se deben considerar múltiples criterios. Los informes de los Centros para el Control de Enfermedades indican que es más probable que los leucocitos se confundan con Entamoeba histolytica que con otros protozoos.
Actualmente existen muchos métodos que se pueden utilizar para identificar Entamoeba histolytica y Entamoeba dispane, incluidos el análisis de isoenzimas, el ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas y el análisis de reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Utilizando la lectina de galactosa/acetilgalactosamina de superficie de Entamoeba histolytica como antígeno diana y utilizando anticuerpos monoclonales para detectarlo, su sensibilidad y especificidad en sangre y heces alcanzaron el 88% y el 99%. Actualmente, los kits de prueba están a la venta en Europa, Estados Unidos y Japón. El método de PCR puede identificar directamente las dos especies de amebas a nivel de ADN, entre las cuales la detección del gen que codifica el antígeno policistina de 29/30 kDa es la más específica y factible. También se ha informado que la PCR fecal directa se puede utilizar para identificar rápidamente dos especies de amebas.
El Comité Especial de la OMS recomendó que los quistes que contienen cuatro núcleos detectados al microscopio deben identificarse como Entamoeba histolytica/Entamoeba dispane; la detección de trofozoítos que contienen glóbulos rojos en las heces debe ser una prueba serológica altamente sospechosa de infección por Entamoeba histolytica; resultados, un título alto positivo debe ser altamente sospechoso de infección por Entamoeba histolytica; la amebiasis solo es causada por Entamoeba histolytica. Se trata de un método que se ha desarrollado rápidamente en los últimos diez años y es muy eficaz, sensible y específico. Extrae principalmente ADN del líquido de aspiración de pus o del cultivo de heces, biopsias de tejido intestinal, secreciones de úlceras cutáneas, pus y heces con sangre e incluso heces formadas, y luego utiliza cebadores apropiados para realizar reacciones de amplificación. El análisis de electroforesis de los productos de reacción puede distinguir a Entamoeba histolytica de otras amebas. Hay muchos tipos de cebadores, cada uno con sus propias ventajas, pero en principio, se deben seleccionar genes con gran abundancia para lograr una buena sensibilidad. Los cebadores actualmente reconocidos en el mundo con buena especificidad y sensibilidad están diseñados en base al gen que codifica el antígeno de policisteína de 29kDa/30kDa de Entamoeba histolytica.
Actualmente, muchos laboratorios aplican serología y análisis de ADN o detectan antígenos en las heces para realizar investigaciones epidemiológicas de la amebiasis. La amebiasis intestinal debe distinguirse de la disentería bacilar, esta última tiene un inicio agudo, fiebre, mal estado general, más glóbulos blancos en las heces, tratamiento antibiótico eficaz y trofozoítos amebianos negativos.
El absceso hepático amebiano debe distinguirse principalmente del absceso hepático bacteriano. Los pacientes con este último suelen tener más de 50 años, mal estado general, fiebre y dolor, antecedentes de enfermedades gastrointestinales y trofozoítos amebianos negativos. Al mismo tiempo, el absceso hepático amebiano también debe distinguirse del cáncer de hígado, la hepatitis u otros abscesos.