El proceso de secretar SOD fuera de las células, como el cultivo sólido de Penicillium, Mucor o Aspergillus, puede secretar SOD fuera de las células y obtener SOD. En términos de ingeniería genética, los países extranjeros también han logrado muchos avances. Por ejemplo, los japoneses trataron un cultivo en suspensión de bacterias genéticamente modificadas que contenían ADN recombinante de SOD con ondas ultrasónicas en un tampón que contenía sales de cobre y sales de zinc durante un período de tiempo para obtener Cu, Zn-SOD, mientras que Estados Unidos está más avanzado en utilizando tecnología de ingeniería genética para producir SOD.
2. Estado actual de la investigación nacional
En la actualidad, la investigación nacional sobre el proceso de separación y purificación aproximada de SOD es cada vez más profunda, pero su aplicación es mucho menor. que la de países extranjeros. Se ha utilizado una variedad de SOD medicinal en la práctica clínica en el extranjero. La aplicación de SOD nacional se concentra principalmente en el campo de alimentos y productos sanitarios. Por ejemplo, Zhang Bo-8 y otros utilizaron sangre de vaca como materia prima y, después de la precipitación, conversión térmica, reprecipitación, columna DEAE-SephadexA -50 y una serie de pasos para la purificación. La actividad específica de la SOD en sangre bovina aumentó de 65438±0834 u/mg a 2325U/mg. Cui Luanyao9 y otros utilizaron camarones como materia prima para purificar SOD utilizando métodos como la desnaturalización térmica, la sal con sulfato de amonio y la purificación en capas. Cheryl L. Fattman 10 y otros utilizaron cromatografía en agarosa para purificar la solución enzimática cruda de SOD en células de pulmón de rata. Zhang Shuwen11 y otros. Se adopta el método de desnaturalización térmica secundaria, eliminando el uso de disolventes orgánicos como el cloroformo. Sun Yongjun, 12º grado. Utilizando ajo (planta) como materia prima, se preparó una solución enzimática cruda de SOD utilizando el método de extracción con tampón fosfato y el método de desnaturalización térmica. En términos de ingeniería genética, el Instituto Siping de Ciencia y Tecnología de China ha desarrollado el proyecto SOD después de años de arduo trabajo, que consiste en extraer el gen SOD del cuerpo humano. Después de la amplificación por PCR, se construyó ADNc humano y luego se construyó el plásmido. Luego, el plásmido se transfiere a las células receptoras, donde se expresa en grandes cantidades. El instituto es el único fabricante nacional de SOD humanizado genéticamente recombinante. Todavía existe una cierta laguna en la investigación nacional y extranjera sobre el uso de tecnologías de bioingeniería e ingeniería genética para producir SOD medicinal.
3. Importancia de la investigación
En el proceso de purificación de SOD existente, el proceso de clasificación gruesa es un vínculo inevitable, en el que se utilizan una gran cantidad de disolventes orgánicos (como etanol, cloroformo, etc.). .) O se deben usar sales inorgánicas (como sulfato de amonio, fosfato, etc.) para eliminar la mayoría de las impurezas mediante precipitación gradual de solventes orgánicos y sales inorgánicas para obtener SOD cruda. Luego podemos utilizar precipitación con acetona, concentración por ultrafiltración, diálisis, cromatografía en columna y otros procesos para una purificación profunda. En primer lugar, después de extraer la proteína objetivo mediante precipitación fraccionada, el líquido residual a menudo contiene altas concentraciones de disolventes orgánicos o sales inorgánicas, que son muy difíciles de recuperar, lo que ejercerá una gran presión sobre la protección del medio ambiente; método de disolventes orgánicos y sales inorgánicas El ciclo de operación es largo y la solución de extracción a menudo necesita además dejarse a baja temperatura durante la noche para permitir que la proteína se hunda;