Al examinar bi-2536 por su actividad antiproliferativa, encontramos que este compuesto inhibía fuertemente el crecimiento de las células plk1wt pero no de las células plk1as. o ningún efecto (Figuras 1, 2). Para determinar si bi-2536 altera de manera única la eficacia del inhibidor, realizamos configuraciones experimentales de desafío de crecimiento similares utilizando inhibidores de Plk 1 de diferentes estructuras. En tercer lugar, observamos que las células plk1as difieren significativamente de sus contrapartes genéticas en plk1wt (DIC, dev). Para comprender la profundidad y amplitud de la resistencia a los inhibidores, interrogamos una variedad de lecturas y actividades en el cuerpo. PLK 1 es necesaria para un buen funcionamiento durante la mitosis, la maduración del centrosoma, el ensamblaje del huso bipolar, la unión estable de los microtúbulos móviles y la iniciación en el citoplasma. Todos estos procedimientos se demostraron tanto cualitativa como cuantitativamente contra dos inhibidores dirigidos a PLK1. Por ejemplo, las células plk1as continúan reclutando centrosomas con γ-tubulina (una expresión esencial de la maduración del centrosoma) y bi-2536 (Figura 2) y Tal (Panel B) presentes en el huso bipolar. Asimismo, la capacidad de hiperfosforilar Bubr1, un factor clave en la estabilización de la unión de microtúbulos móviles, no se vio comprometida, como se refleja en la electroforesis por transferencia de flujo continuo de polipéptidos como BubR 1 (Figura 2). De acuerdo con este amplio defecto, estos dos compuestos provocaron una detención mitótica en las células PLK 1G, pero no en las células plk1as. Observe su apariencia redonda y la microscopía de contraste de fases (Figura 4).
Papel de mitosis
La quinasa 1 tipo Kelpolo (PLK 1) es un objetivo importante. Debido a sus funciones requeridas, las terapias contra el cáncer pueden dividir las células y aumentar la susceptibilidad de las células cancerosas a la inactivación. Han surgido varios fármacos dirigidos a plk1, incluidos bi-2536 y ZK-tiazolidinona (TAL). Estos inhibidores y la mitosis y el fenotipo celular detenidos son consistentes con otros medios de regulación negativa de Plk 1, bi-2536 y simulaciones farmacológicamente optimizadas (bi-6727), que se han mostrado prometedores en ensayos clínicos preliminares. También se han desarrollado las capacidades inhibidoras de los sistemas de genes químicos. En este sistema, las células epiteliales pigmentarias de la retina humana inmortalizadas con dos copias del gen PLK 1 eliminadas se someten a recombinación mediante localización y mediación cre-lox. En la escisión mediada por Cre, los clones de Plk 1 –/– no se pueden clonar a menos que complementen la expresión de Plk 1, ya sea de tipo salvaje (plk1wt) o mutante compuesto (L 130g c67v; seguido de plk1as). Al ampliar el sitio activo de la quinasa, esta última mutación permite que Plk 1 acepte análogos de purina voluminosos, como los inhibidores competitivos del trifosfato de adenosina. Informamos aquí que estas mutaciones también tienen efectos inesperados sobre la desensibilización de inhibidores clínicamente útiles de Plk 1, como bi-2536 y TAR. (Todos los productos químicos utilizados en la estructura se muestran en la Figura 1 complementaria).