Método de tinción de Wright:
Para observar la estructura interna de las células e identificar diversas células y cambios anormales, se deben teñir frotis de sangre.
La mayoría de los distintos métodos de tinción para frotis de sangre se derivan del método de tinción de Roche. Actualmente se utiliza habitualmente la tinción de Wright.
Objetivo Dominar el método de tinción del frotis de sangre.
Principio
Unte la fina película preparada con células sanguíneas distribuidas uniformemente y tiñe con un tinte compuesto.
El principio de coloración incluye la adsorción física
y la afinidad química.
Los diferentes tipos de células y los diferentes componentes y estructuras de una misma célula tienen diferentes capacidades de unión a colorantes ácidos y básicos
, lo que hace que diferentes tipos de células se tiñen de diferentes colores. mostrando sus propias características.
Equipo Nuestro equipo hoy en día es: portaobjetos, portaobjetos, bolas de succión y microscopios.
Reactivo
1
Colorante de Wye
Compuesto por el colorante ácido eosina (eosina, E) y el colorante básico azul de metileno A Colorante compuesto compuesto por (azul de metileno,M|+).
★El azul de metileno (también conocido como azul de metileno) es un colorante de tetrametiltionina con dos estructuras: tipo paraquinona y tipo o-quinona. Suele ser una sal de cloruro, concretamente cloruro de azul de metileno. El azul de metileno se oxida fácilmente en tintes secundarios como mono, di y trimetiltionina (es decir, azul).
★La eosina suele ser una sal de sodio.
★Disolver una cantidad adecuada de eosina y azul de metileno en metanol para formar el tinte de Wright.
Las funciones del metanol: primero, disuelve el azul de metileno y la eosina ME y los disocia en M+ y E+. Estos dos últimos pueden adsorberse selectivamente a diferentes componentes en las células sanguíneas para colorearlos
<. p>En segundo lugar, tiene un fuerte efecto de deshidratación y puede fijar la forma de las células. Cuando las células se coagulan, las proteínas se precipitan en gránulos o redes, lo que aumenta la superficie de la estructura celular y mejora la adsorción de los tintes. efectos.2
Preparación de la solución de tinte de Wright: Tomar 1,0 g de tinte de Wright, 600 ml de metanol y 15 ml de glicerina.
El funcionamiento es el siguiente: Poner todo el tinte en un mortero limpio y seco, primero añadir una pequeña cantidad de metanol y triturar lentamente
(al menos media hora) hasta completar disuelva el tinte. Agregue un poco de metanol y mezcle bien, luego vierta la parte disuelta en una botella marrón limpia. Agregue un poco de metanol al tinte restante sin disolver en el mortero y tritúrelo con cuidado varias veces hasta que el tinte esté completamente disuelto. el metanol se agota hasta. Añade 15ml de glicerol y guárdalo en un recipiente hermético. Esta es solo la solución que preparamos.
Nota: la solución de tinte recién preparada es alcalina y tiene un efecto de teñido deficiente. Después de almacenarse a temperatura ambiente durante un cierto período de tiempo, el azul de metileno se transforma gradualmente en azul B antes de su uso. madurez. Cuanto más tiempo se deje, más azul aparecerá y mejor será el efecto de teñido. Sin embargo, la boca de la botella debe estar bien cerrada para evitar que el metanol se evapore o se oxide en ácido fórmico. También se pueden agregar 3 ml de glicerina neutra a la solución de tinte para evitar que el metanol se evapore u oxide, y también puede hacer que las células sanguíneas se tiñen más claramente, pero el metanol que usemos debe ser puro.
Solución II: también llamada tampón fosfato (PH6,4-6,8), contiene 0,3 g de dihidrogenofosfato de potasio, 0,2 g de hidrogenofosfato de disodio y agua destilada añadidos a 1000 ml.
Después de la preparación, utilizar solución de fosfato para corregir el pH. Si no hay tampón, se puede utilizar agua destilada fresca.
En su lugar también se puede utilizar agua destilada.
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Tinción: ① Después de que el frotis de sangre se haya secado naturalmente, use un crayón para dibujar líneas en ambos extremos para evitar que el tinte se derrame durante la tinción. Luego, coloque el portaobjetos sobre la rejilla de tinción y agregue de 3 a 5 gotas de solución de tinte para cubrir el frotis de sangre. Después de aproximadamente 1 minuto, agregue la misma cantidad o un poco más de solución II.
Utilice una bola de succión. mezclar suavemente.
② Aclarado: Teñir con agua corriente durante 5-10 minutos y esperar hasta que se seque.
③Observar los resultados.
Observar el frotis de sangre seca al microscopio.
Primero utilice una lente de bajo aumento para observar el frotis de sangre,
luego utilice una lente de aceite.