No es necesario agregar marcadores en el experimento de PCR en sí, pero es necesario agregar marcadores cuando se ejecuta la electroforesis después de la PCR. Se utiliza para comparar el tamaño de los productos de PCR para ver si las bandas electroforéticas de la PCR. los productos cumplen con sus expectativas.
El motivo de añadir marcadores en la PCR:
Los marcadores son combinaciones artificiales de una serie de ADN de tamaños conocidos (o proteínas de masa conocida, por supuesto el ADN se utiliza en la PCR
(no marcadores de proteínas) se mezclan y se usan para el control durante la electroforesis. Después de realizar la electroforesis, verá varias bandas claras del marcador, y este marcador puede determinar el tamaño de cada banda. Lo encontré en el manual de instrucciones. Por lo tanto, al comparar las tiras, puede conocer aproximadamente el rango de tamaño de las tiras que necesita.
PCR:
La PCR (reacción en cadena de la polimerasa) utiliza el ADN para desnaturalizarlo en hebras individuales a una temperatura alta de 95°C in vitro, y a baja temperatura (generalmente alrededor de 60°C ) Cuando el cebador y la cadena sencilla se combinan según el principio de emparejamiento de bases complementarias, la temperatura se ajusta a la temperatura de reacción óptima de la ADN polimerasa (aproximadamente 72 °C), y la ADN polimerasa sigue el camino desde el fosfato hasta el de cinco carbonos. azúcar (5'-3') dirección para sintetizar hebras complementarias. El instrumento de PCR fabricado a base de polimerasa es en realidad un dispositivo de control de temperatura, que puede controlar bien la temperatura de desnaturalización, la temperatura de renaturalización y la temperatura de extensión.
Marcador:
Marcador (marcador), una región del cromosoma que se puede identificar (como el punto de corte de la enzima de restricción, la ubicación del gen, etc.). Se puede detectar la herencia de marcadores. El marcador puede ser una parte del cromosoma que tiene una función de expresión (como un gen), o puede ser una parte que no codifica una proteína pero cuyas características genéticas pueden detectarse.