Es posible moler en nitrógeno líquido y los demás pasos deberían ser esencialmente los mismos.
1. Materiales y métodos
Después de la centrifugación, los fluidos separados del corazón, hígado, músculo, cerebro y suero de la carpa cruciana se analizaron mediante electroforesis.
La electroforesis utiliza poliacrilamida como soporte, y las concentraciones del gel de concentración y del gel de separación se muestran en la Tabla 2.
Nombre del reactivo: Cantidad de cada reactivo necesaria para preparar 20ml de geles de separación de diferentes concentraciones/cantidad de reactivos necesaria para preparar 10ml de gel concentrado.
5 7,5 10 15 3
Almacenamiento de gel separador 3,33 5,00 6,66 10,00
Tampón de gel separador 2,50 6,50 2,50 2,50
Almacenamiento de pegamento de concentración solución 1,65
Tampón gel concentrado 1,25
1 TEMED 2,00 2,00 2,00 2,00 1,00
Agua destilada 12,07 6,50 8,74 5,40 7,03
Después de mezclar , colocarlo en un secador al vacío y evacuar el aire durante 10 minutos.
1 AP 0,10 0,10 0,10 0,10 0,05
Tabla 2 Preparación de gel del sistema discontinuo
Para prevenir la LDH y sus isoenzimas de los residuos de polimerización del gel La influencia de objetos (como AP, etc.). ) y causar inactivación de enzimas u otros efectos artificiales, la preelectroforesis debe realizarse a 20 mA durante media hora antes del muestreo. Luego, apague la energía, agregue cinco sueros tisulares, incluidos corazón, hígado, músculo, cerebro y suero, y un volumen igual de solución mixta de sacarosa y azul de bromofenol, prestando atención al orden de adición. La electroforesis se realizó con tampón de electrodo de Tris-glicina a 20 mA durante 4 horas. Después de la electroforesis, retire la placa de gel, colóquela en una solución de tinte reactiva para teñirla y luego enjuáguela con agua. La preparación de soluciones de tintes reactivos se muestra en la Tabla 3.
Solución de almacenamiento NAD lactato sódico NaCl NBT PMS solución tampón fosfato
Dosis/ml
Tabla 3 Preparación de la solución colorante reactivo LDH