Sin embargo, este método no es adecuado para una aplicación a gran escala, ni tampoco para el diagnóstico de casos sospechosos. Esto se debe a que el cultivo del virus lleva mucho tiempo y requiere condiciones de sitio muy altas (laboratorio P3), y la puntualidad está lejos de satisfacer las necesidades clínicas.
Como uno de los métodos de detección de patógenos, las pruebas de ácido nucleico son muy eficientes y, en circunstancias normales, los resultados se pueden conocer en unas pocas horas. Por tanto, en esta epidemia, la principal forma de obtener evidencia clínica de la etiología no es el cultivo del virus sino la detección del ácido nucleico.
El ácido nucleico es el portador de información genética y es el término general para referirse al ADN y al ARN. Los virus están compuestos principalmente de material genético y proteínas. El nuevo coronavirus es un virus ARN cuyo material genético es ARN monocatenario. El principio de las pruebas de ácido nucleico es detectar la presencia de ARN viral en muestras como hisopos de garganta de sujetos. Si existe, significa que está infectado por un virus. Entonces, ¿entendemos el ARN viral?
△ARN y ADN (red fuente de imágenes)
En los primeros días de la epidemia de Wuhan, el Centro Chino para el Control y la Prevención de Enfermedades utilizó tecnología metagenómica para completar la identificación del virus. en poco tiempo y obtuvo la secuencia completa del genoma. Después de que se publicó la secuencia completa del genoma del virus, se desarrollaron rápidamente reactivos fluorescentes de reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa (RT-PCR) en tiempo real.
Posteriormente, los kits de detección de ácido nucleico se utilizaron en la práctica clínica, proporcionando una base etiológica para el diagnóstico de la neumonía por el nuevo coronavirus. Entonces, ¿cuál es el proceso de utilizar un kit para pruebas de ácido nucleico?
En primer lugar, el inspector necesita utilizar reactivos para extraer los ácidos nucleicos de la muestra. Luego, el ácido nucleico separado se agrega al reactivo de amplificación de ácidos nucleicos y luego se coloca en el instrumento de amplificación de ácidos nucleicos. Los resultados generalmente estarán disponibles en dos horas.
De hecho, la amplificación es un paso muy importante en los pasos de operación. La importancia de la amplificación es el aumento exponencial de trazas de información genética. Siempre que haya un fragmento del gen del ácido nucleico en la muestra, se puede amplificar mediante PCR para compararlo más claramente con la secuencia completa del genoma del virus.
La reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa por fluorescencia en tiempo real (RT-PCR) se utiliza en laboratorios clínicos desde hace muchos años. El sistema de detección es maduro y tiene las ventajas de una fuerte especificidad, alta sensibilidad, ciclo de detección corto y detección cuantitativa. También puede monitorear dinámicamente el grado de infección viral y el efecto del tratamiento.
Chen Xin, médico jefe del Departamento de Medicina Respiratoria y de Cuidados Críticos del Hospital de la Amistad China-Japón, dijo en una entrevista con periodistas: Las pruebas de ácido nucleico son muy sensibles. Siempre que se encuentre parte del ácido nucleico viral en la muestra de secreción de un paciente, se puede integrar en la secuencia mediante amplificación por RT-PCR.
“Aunque no se puede determinar si el ácido nucleico proviene de un virus vivo, en pacientes con síntomas de infección respiratoria o pacientes sospechosos, si sus hisopos de garganta contienen dicho ácido nucleico, generalmente se considera parte de el virus vivo, lo que prueba indirectamente que están infectados. Hay reproducción e infección del virus en el cuerpo", dijo Chen Xin a los periodistas.
Las pruebas de ácido nucleico son propensas a dar "falsos negativos"
Aunque las pruebas de ácido nucleico tienen las ventajas de una alta sensibilidad y un ciclo de detección corto, también tienen algunas desventajas. A diferencia del método de aislamiento directo de virus vivos del cuerpo humano, la prueba de ácido nucleico es un método indirecto que puede provocar falsos negativos.
Debido a que el kit tiene un límite mínimo de detección, solo se puede detectar si el contenido de virus en las muestras recolectadas alcanza un cierto nivel. En algunos casos, es posible que la persona recuperada no pueda recuperarse, pero debido a la baja carga viral en la muestra, el resultado de la prueba de ácido nucleico de la persona recuperada es negativo, que es lo que a menudo llamamos un "falso negativo".
Por lo tanto, en los "Estándares de diagnóstico y tratamiento del nuevo coronavirus (séptima edición de prueba)", uno de los criterios de alta es recolectar muestras respiratorias como esputo e hisopos nasofaríngeos dos veces seguidas (el intervalo de muestreo es al menos 24 horas) )Negativo.
La razón por la que se eligieron muestras respiratorias para las pruebas de ácido nucleico es porque el COVID-19 es una enfermedad infecciosa respiratoria, por lo que las muestras se obtienen primero de las secreciones respiratorias. El tracto respiratorio se divide en tracto respiratorio superior y tracto respiratorio inferior. El primero incluye principalmente la nariz, la faringe y la laringe; el segundo incluye principalmente la tráquea, los bronquios principales y los bronquios en todos los niveles de los pulmones.
Por lo tanto, actualmente existen dos tipos de muestras recolectadas para detectar ácidos nucleicos virales en pacientes sospechosos: muestras del tracto respiratorio superior y muestras del tracto respiratorio inferior.
Las muestras del tracto respiratorio superior incluyen principalmente hisopos orofaríngeos, hisopos nasofaríngeos (NPS) y aspirados nasofaríngeos (NPA). Las muestras del tracto respiratorio inferior incluyen principalmente esputo, aspirado traqueal y líquido de lavado broncoalveolar (BALF).