Me da pereza escribir, así que lo publicaré.
La hibridación de ácidos nucleicos es una técnica estándar en biología molecular que se utiliza para detectar secuencias específicas (secuencias diana) de moléculas de ADN o ARN. El método clásico de hibridación de ácidos nucleicos consiste en transferir y fijar primero el ADN o el ARN a una membrana de nitrocelulosa o nailon. La sonda complementaria de ADN o ARN monocatenario se marca con un marcaje radiactivo o no radiactivo. a través de hidrógeno. El enlace se une a su secuencia diana complementaria. Después de eliminar por lavado la sonda libre no unida, la sonda unida específicamente se detecta mediante autorradiografía o reacción cromogénica.
Los métodos clásicos de hibridación computacional incluyen principalmente: hibridación por transferencia Southern, hibridación por transferencia Northern, hibridación por transferencia puntual e hibridación in situ:
1. Hay dos métodos de transferencia de ácido nucleico:
Solución localizada de ADN o ARN directamente sobre una membrana de nitrocelulosa o membrana de nailon (transferencia por puntos o ranuras)
Transferir ADN o ARN fragmentado a una membrana mediante gel de agarosa electroforesis (transferencia Southern y Northern). El ADN fue digerido con enzimas de restricción antes de la electroforesis.
2. Hibridación por transferencia de ARN:
La hibridación por transferencia de ARN es una tecnología que detecta secuencias diana específicas de ARN total o ARNm que se han fijado en la membrana del filtro.
3. Hibridación por transferencia de puntos
Coloque una pequeña cantidad de muestra de ácido nucleico en la membrana del filtro de nitrocelulosa. Después de hornearla a 80 ℃, se puede fijar firmemente en la membrana y luego. utilizar una sonda. Las membranas de nailon, especialmente el fluoruro de polivinilideno (PVDF), tienen una mayor fuerza de unión al ADN, son resistentes y fáciles de operar. La localización se puede realizar manualmente o las muestras se pueden colocar manualmente. La detección se puede realizar mediante autorradiografía con sonda radiactiva o desarrollo de color con sonda no radiactiva. Se puede utilizar para análisis de ADN o ARN.
4. Hibridación in situ
En las condiciones de mantenimiento de la morfología celular, se realiza la hibridación intracelular, el desarrollo o el desarrollo del color. Se puede utilizar para análisis de ADN o ARN. El análisis del ADN cromosómico mediante hibridación fluorescente in situ (FISH) se utiliza en muchas áreas de la investigación biológica, así como en estudios citogenéticos clínicos. Su principal ventaja es que puede diagnosticar cambios cromosómicos no sólo en los núcleos en metafase sino también en interfase.
La hibridación de ácidos nucleicos en un sentido amplio se refiere al proceso de renaturalización (enlaces de hidrógeno) entre moléculas de ácidos nucleicos no homólogas. Por lo tanto, se puede decir que la tecnología actual de pruebas genéticas, además del método de detección masiva, implica más o menos el principio de hibridación de ácidos nucleicos. Como el proceso de renaturalización del cebador de la PCR, el proceso de detección de hibridación del chip genético, el proceso de renaturalización del cebador de la secuenciación de genes, varios métodos de detección de SNP, etc.