Determinación del contenido de azúcares solubles en tejidos vegetales.

Principio del método del fenol para determinar los azúcares solubles: los azúcares solubles en las plantas se refieren principalmente a monosacáridos y oligosacáridos que son solubles en agua y etanol. El principio de medir el azúcar soluble mediante el método del fenol es que el furfural o el hidroximetilfurfural (consulte el método de la antrona para obtener la fórmula molecular) generado por la deshidratación del azúcar bajo la acción del ácido sulfúrico concentrado puede condensarse con el fenol para formar un compuesto de color rojo anaranjado, y su color varía entre 10 y 100 mg. Es directamente proporcional al contenido de azúcar y tiene un pico de absorción máximo en una longitud de onda de 485 nm, por lo que se puede medir por colorimetría en esta longitud de onda. El método del fenol se puede utilizar para determinar azúcares, pentosas y polisacáridos metilados. El método es sencillo, los reactivos son baratos y la sensibilidad es alta. Básicamente, el experimento no se ve afectado por la presencia de proteínas y el color producido puede permanecer estable durante más de 160 minutos.

2. Materiales, equipos y reactivos

(1) Materiales: hojas frescas de plantas.

(2) Instrumentos y equipos: 1. Espectrofotómetro; 2. Baño de agua; 3. Tubo de ensayo de calibración; 4. Pajita de escamas de pescado.

(3) Reactivo: Pesar 90 g de fenol (AR) de la solución de fenol al 1,90 % y disolverlo en 10 ml de agua destilada. Puede almacenarse a temperatura ambiente durante varios meses; tomar 3 ml de la solución de fenol al 90%, agregar agua destilada a 30 ml, listo para usar; 3. Ácido sulfúrico concentrado (gravedad específica 1,84), solución estándar de sacarosa al horno analítico puro a 80 °C hasta obtener un peso constante. , pesar con precisión 1.000g. Agregar una pequeña cantidad de agua para disolver, transferir a un matraz aforado de 100ml, agregar 0,5ml de ácido sulfúrico concentrado y ajustar el volumen hasta la marca con agua destilada. 5. Pipetear con precisión 1ml de 100μg/; L solución estándar de sacarosa y solución estándar de sacarosa al 1%, agregarla al matraz aforado de 100 ml y agregar agua hasta la marca.

3. Pasos experimentales

1. Preparación de la curva estándar: agregue 1 ml de solución de fenol al 9% en el tubo de ensayo y agite bien, luego agregue 5 ml de ácido sulfúrico concentrado desde el frente. extremo de la solución del tubo de ensayo durante 5 ~ 20 segundos y agite bien. El volumen total de la solución colorimétrica es de 8 ml y se deja a temperatura ambiente durante 30 minutos. Luego use el blanco como referencia, dibuje una curva estándar a una longitud de onda de 485 nm, tome el contenido de azúcar como abscisa y la absorbancia como ordenada, y obtenga la ecuación lineal estándar.

2. Extracción de azúcar soluble: Tome hojas frescas de plantas, limpie la suciedad de la superficie, córtelas en trozos, mezcle bien, pese 0,10 ~ 0,30 g, *** 3 partes (o materiales secos), agregue Vierta de 5 a 10 25 ml de agua destilada en tres tubos de ensayo graduados, selle con film plástico y extraiga en agua hirviendo durante 30 minutos (extracción durante 2 minutos).

3. Determinación: Tome 0,5 ml de solución de muestra en el tubo de ensayo (repita dos veces), agregue 1,5 ml de agua destilada, agregue fenol y una solución de ácido sulfúrico concentrado en secuencia de acuerdo con los pasos para hacer la curva estándar. desarrollar color y medir la absorbancia. Encuentre el contenido de azúcar a partir de la curva estándar.

IV.Cálculo de resultados

Calcular el contenido de azúcar de la muestra según la siguiente fórmula:

Contenido de azúcar soluble (%) = azúcar encontrado en la curva estándar La cantidad (μg) × el volumen de la solución de extracción (mL) × factor de dilución/[el volumen de la solución de muestra para medición (mL) × peso de la muestra (g) × 106] × 100.

Las flores recién cortadas no son medicina ni alimento, por lo que no existen normas nacionales.