Los principales métodos para aislar protoplastos vegetales incluyen métodos mecánicos y métodos enzimáticos.
1. Método de separación mecánica: se utiliza a menudo para separar los protoplastos de las algas. El método de ósmosis se utiliza para provocar la plasmólisis de las células y se corta la pared celular con un cuchillo para permitir que los protoplastos fluyan. (La operación manual es difícil, el rendimiento es bajo y requiere mucho tiempo y mano de obra)
2 Método de separación enzimática: utilice enzimas (agarasa, pectinasa, celulasa, etc.) para descomponer la sustancia. pared celular. (Condiciones suaves, buena integridad de los protoplastos, alta actividad y alto rendimiento). Por lo tanto, la hidrólisis enzimática se usa a menudo para preparar protoplastos. El proceso operativo de este método se divide en: extracción y desinfección de materiales, preparación de hidrólisis enzimática y recolección de protoplastos.
Protoplasto vegetal
El protoplasto vegetal se refiere a la masa celular esférica expuesta después de que se ha eliminado la pared celular. Dado que no existe una pared celular, una barrera natural entre las células y el entorno externo, los protoplastos se convierten en un sistema experimental ideal y se utilizan ampliamente en investigación teórica básica, transformación genética, variación clonal y detección de mutantes, aislamiento e introducción de orgánulos, germoplasma. Preservación de recursos. y otros campos. Sin embargo, la aplicación más convincente de los protoplastos es la hibridación de células somáticas.
Métodos de fusión de protoplastos vegetales
1. Método de fusión de sales: este método es el método más antiguo para inducir la fusión de protoplastos. La ventaja del método de fusión de sales radica en el agente de fusión de sales. Tiene poco poder destructivo sobre los protoplastos y su desventaja es que la frecuencia de formación de heterocariones no es alta;
2. Método de fusión con alto contenido de Ca2+ y pH alto: su ventaja es que puede obtener una mayor velocidad de fusión. , y su desventaja es que para algunos sistemas de protoplastos, un pH más alto puede tener un cierto efecto tóxico;
3. Método de fusión de polietilenglicol (método PEG): su ventaja es la formación de heterocariones. La velocidad es muy alta. alto, la reproducibilidad es fuerte, la toxicidad es muy baja para la mayoría de los tipos de células y la proporción de dicariones es muy alta.
4. Método de electrofusión: el método de electrofusión consiste en combinar una cierta densidad de protoplastos; están suspendidos en una cámara fusionada y los electrodos están instalados en ambos extremos de la cámara. La ventaja es que las condiciones de fusión son más digitales y fáciles de controlar y comparar entre sí.