1. Se clonó el gen PPF-1 ligado a la característica de no senescencia de día corto del guisante y se indujo su expresión mediante giberelina.
Después de conectar el gen PPF1 con el gen indicador GFP e introducirlo en las células epidérmicas de la punta de la raíz de la cebolla mediante bombardeo con pistola genética, se descubrió que una gran cantidad de marcadores fluorescentes verdes se concentraban en la membrana celular. Después de la transformación permanente de Arabidopsis thaliana, se descubrió que la etiqueta fluorescente verde estaba concentrada en la membrana del cloroplasto. El gen se conectó al promotor 35S y se introdujo en el genoma de Arabidopsis en modo directo o inverso. Se descubrió que la expresión directa del gen PPF1 podría retrasar significativamente el proceso de floración, crecimiento y desarrollo de Arabidopsis transgénica, y retrasar su senescencia. La expresión inversa de este gen para inactivar el gen homólogo original en Arabidopsis avanzará significativamente el período de floración de las plantas transgénicas y acelerará la senescencia de las plantas. El gen PPF1 se conectó aguas abajo del promotor del gen animal y se introdujo en una línea celular cancerosa que no tenía corriente de calcio interna. Se confirmó que la línea celular transformada tenía una fuerte corriente de calcio hacia adentro, lo que indica que el gen PPF1 puede codificar un canal de calcio. proteína en plantas. Estamos realizando estudios de hibridación de localización in vivo y de expresión in vitro de ADNc específicamente expresado en células no senescentes para revelar sus características fotoperiódicas, reglas de regulación de la expresión y relación con la senescencia celular.
2. Aislamiento y clonación a gran escala de genes expresados específicamente en las primeras etapas del desarrollo de la fibra de algodón.
Utilizando el algodón Upland Xuzhou 142 y el mutante sin pelusa (fuzless-lintless, fl) como materiales experimentales, mediante el aislamiento, la identificación y el estudio a gran escala de genes relacionados con la fase de elongación de la fibra de algodón, estamos buscando Genes objetivo de ingeniería genética para mejorar la fibra de algodón. Se seleccionaron fibras de algodón americano (upland) y óvulos mutantes fl como materiales de partida 10 días después de la antesis (10 días después de la antesis), cuando las fibras de algodón se alargan más rápido, y se obtuvo una biblioteca de sustracción de ADNc específica de fibra utilizando el método de sustracción de ADNc PCR-Select. , se aislaron 172 genes específicos de fibras o altamente expresados, sentando una buena base para dilucidar el mecanismo molecular del desarrollo de la fibra de algodón.
3. Desarrollo y aplicación de la vacuna multivalente de ácido nucleico bovino contra Mycobacterium tuberculosis.
Se clonaron las secuencias genéticas estructurales completas de proteínas secretadas como MPT-64, Ag85B, ESAT-6, MPT-63 y MPT-83, y se clonó una gran cantidad de ADN del vector de expresión recombinante pJW4303 libre de endotoxinas. Se prepararon y se desarrollaron dos grupos de combinaciones de vacunas trivalentes de ADN de Mycobacterium tuberculosis, con una eficacia protectora del 100% para animales y ratones modelo. La mejor combinación logró entre 80 y 100 veces la reducción bacteriana del grupo de control positivo de BCG y aproximadamente 30.000 veces. la del grupo de control negativo. Por primera vez, se utilizaron dos grupos de vacunas trivalentes seleccionadas para realizar experimentos de inmunidad y desafío en ganado vacuno de este animal. Los resultados de la autopsia mostraron que la tasa de protección de la vacuna de ADN multivalente contra Mycobacterium tuberculosis bovina en este animal alcanzó el 75-80%. mientras que la tasa de protección en el grupo de control negativo fue del 75-80% es 0, y la tasa de protección del grupo de control positivo de BCG es 20.