Después de esterilizar la muestra a 80 °C, se agrega Streptococcus thermophilus. Después de un período de cultivo, Streptococcus thermophilus comienza a proliferar. En este punto, se añadió el sustrato metabólico humano monocloruro de 2,3,5 trifeniltetrazol (TTC). Si la muestra no contiene antibióticos o la concentración de antibióticos está por debajo del límite de detección, Streptococcus thermophilus continuará proliferando y reducirá el TTC a una sustancia roja. Por el contrario, si la muestra contiene un agente bacteriostático por encima del límite de detección, Streptococcus thermophilus se inhibe, por lo que el indicador TTC no disminuye y mantiene su color original.
2. Método de inhibición de Bacillus stearothermophilus
El medio de cultivo lleva preañadidas esporas de Bacillus stearothermophilus y contiene un indicador de pH (púrpura de o-cresol). Después de agregar muestras humanas e incubarlas, si la muestra no contiene antibióticos o la concentración de antibióticos está por debajo del límite de detección, las esporas bacterianas crecerán en el medio de cultivo y usarán azúcar para producir ácido, y el color púrpura del indicador de pH cambiará. amarillo. Por el contrario, si la muestra contiene antibióticos por encima del límite de detección, las esporas bacterianas no crecerán y el color del indicador de pH permanecerá violeta.
3. Método de inhibición higrotérmica de Streptococcus
Observar frente a un fondo blanco Cuando la muestra en el tubo de ensayo tiene el color original de la leche, significa que hay antibióticos en el. leche, lo cual es un resultado positivo. El color rojo de la muestra en el tubo de ensayo es negativo. Si la observación final sigue siendo sospechosa, se recomienda volver a realizar la prueba.
4. Método para juzgar la inhibición de Bacillus stearothermophilus
Frente al fondo blanco, observe el color del medio de cultivo en el pequeño tubo de ensayo desde el costado y el fondo. Mantener el color púrpura original del medio de cultivo es un resultado positivo, cambiar el medio de cultivo a amarillo o amarillo verdoso es un resultado negativo y los colores intermedios son resultados sospechosos. Los resultados cuestionables deben incubarse durante 30 minutos antes de la observación final. Si el color del medio de cultivo aún está entre amarillo y morado, significa que la concentración de antibiótico está cerca del límite mínimo de detección del método y se recomienda realizar la prueba nuevamente en este momento.
Solución acuosa de dicloruro de 5,4 trifeniltetrazolio (TTC)
Materias primas
Monocloruro de 2,3,5 trifeniltetrazolio Azol (TTC) 1g
Agua destilada esterilizada 5 ml
Preparación
Pesa el TTC, disuélvelo en agua destilada esterilizada, colócalo en una botella marrón y guárdalo entre 2 ℃ y 5 ℃. Si la solución se vuelve blanca translúcida o marrón claro, ya no se debe utilizar. Cuando esté en uso, diluya 5 veces con agua destilada estéril para obtener una solución acuosa de 4.
6. Solución de referencia de penicilina G
Materias primas
Sal potásica de penicilina G 30,0 mg
Cantidad adecuada de solución tampón fosfato estéril
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Cantidad adecuada de leche descremada sin antibióticos
Método: Pesar con precisión la sal potásica de penicilina G estándar y disolverla en tampón fosfato estéril para obtener una concentración de 100 iu/ml. ~ 1000 ui/ml. Luego, diluya la solución a 0,006 UI/mL con leche descremada estéril sin antibióticos, distribúyala en pequeños tubos de ensayo estériles y séllelos para su uso posterior. Conservar a -20°C durante no más de 6 meses.