Los siguientes son los pasos generales para la determinación de catalasa:
1. Preparación de la muestra: Prepare la muestra a analizar en una concentración y volumen adecuados.
2. Preparar reactivos: Preparar reactivos que contengan peróxido de hidrógeno, generalmente solución de peróxido de hidrógeno.
3. Añadir enzima: Añadir catalasa a la muestra a analizar para que pueda catalizar la descomposición del peróxido de hidrógeno.
4. Tiempo de reacción: Hacer reaccionar la muestra y el reactivo en un periodo de tiempo determinado, normalmente unos minutos a temperatura ambiente.
5. Detener la reacción: Añadir un reactivo de parada de la reacción, normalmente un ácido o una base, para detener la actividad enzimática.
6. Resultados de la medición: Utilice métodos de medición específicos, como colorimetría o fluorescencia, para medir la concentración del producto producido por la reacción para determinar la actividad de la catalasa.
La determinación de la actividad catalasa se basa en las características de la catalasa (PHD) que puede catalizar el peróxido de hidrógeno para generar oxígeno. Comúnmente se utilizan el método yodométrico y el método del electrodo.
El primero calcula la actividad del PHD midiendo el cambio en la cantidad de yodo generado por la reacción entre el H2O2 restante y el yoduro después de que el PHD cataliza la reacción del H2O2. El equipo de este método es simple, pero la operación es complicada y el error es grande.
El principio de este último es que el H2O2 es una sustancia electroactiva, pero el producto después de la catálisis PHD es una sustancia electroactiva. Se utiliza un electrodo de platino para medir el cambio de voltaje causado por el cambio de corriente antes y. después de la catálisis de PHD, y se mide el tamaño activo de PHD. También se puede aplicar espectrofotometría, método de detección de presión del respirómetro Valsalva, método de sulfato cérico, etc.